研究發(fā)現(xiàn)，斑馬魚性腺體衍生因子基因（gsdr）主要在精巢中表達(dá)。為研究gsdf相關(guān)分子的調(diào)控機制模型，科研人員構(gòu)建了以Gamma-crystalin啟動子（使相關(guān)基因在眼部晶狀體特異性表達(dá)）啟動的斑馬魚gsdf基因與增強型綠色熒光蛋白基因（egfp） 融合的熒光素酶報告質(zhì)粒Tg （Crystal-pro-gsdf-2A-egfp,部分構(gòu)建過程如圖1所示），最終成功獲得表達(dá)gsdf基因的轉(zhuǎn)基因斑馬魚。

（1）科研人員提取斑馬魚精巢內(nèi)的總RNA，經(jīng)

逆轉(zhuǎn)錄

逆轉(zhuǎn)錄

過程獲得cDNA，并以其為模板，通過PCR技術(shù)可在總cDNA中專一性的擴增出gsdf基因的cDNA，其原因是

引物是根據(jù)gsdf基因的一段已知序列設(shè)計合成的（或：引物能與gsdf基因的cDNA特異性結(jié)合）

引物是根據(jù)gsdf基因的一段已知序列設(shè)計合成的（或：引物能與gsdf基因的cDNA特異性結(jié)合）

。
（2）圖1中對gsdf基因、2A基因和報告質(zhì)粒載體的切割共需用到

3

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種限制酶。將酶切后的gsdf基因、2A基因定向連接到用

EcoRI、NotI

EcoRI、NotI

雙酶切的報告質(zhì)粒載體中，最終通過系列操作構(gòu)建出熒光素酶報告質(zhì)粒Tg。
（3）圖1中的2A基因表達(dá)的2A肽序列具有“自剪切”的能力，將其置于質(zhì)粒上gsdf基因和egfp基因之間，可以避免這兩個基因表達(dá)出一個融合蛋白。2A肽的“自剪切”原理如圖2，字母G和P代表2A肽最末端的兩個氨基酸。

據(jù)圖2推測2A肽具有“自剪切”能力的原因是

G與P之間未形成肽鍵

G與P之間未形成肽鍵

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（4）某同學(xué)認(rèn)為：gsdf基因在轉(zhuǎn)基因斑馬魚眼部晶狀體中特異性表達(dá)，就成功建立和獲得了能穩(wěn)定遺傳的轉(zhuǎn)基因斑馬魚模型。請對該同學(xué)的觀點進(jìn)行評價并說明理由。

不合理。要將獲得的轉(zhuǎn)基因斑馬魚個體與野生型個體雜交，若后代能夠表達(dá)gsdf基因，（多代雜交獲得純合子）才能說明模型成功建立

不合理。要將獲得的轉(zhuǎn)基因斑馬魚個體與野生型個體雜交，若后代能夠表達(dá)gsdf基因，（多代雜交獲得純合子）才能說明模型成功建立

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