長(zhǎng)期高血糖可引發(fā)血管細(xì)胞衰老?？蒲腥藛T為研究S蛋白在因高血糖引發(fā)的血管細(xì)胞衰老中的作用，以腺病毒為載體將編碼S蛋白的S基因?qū)胙芗?xì)胞，實(shí)現(xiàn)S蛋白在血管細(xì)胞中的大量表達(dá)。

（1）腺病毒的遺傳物質(zhì)為DNA，其復(fù)制需要E₁、E₂、E₃基因共同完成。為將S基因?qū)胂俨《?，科研人員首先構(gòu)建了含S基因的重組質(zhì)粒，如圖1所示。在構(gòu)建含S基因的重組質(zhì)粒時(shí)，通過

設(shè)計(jì)S基因特異的引物進(jìn)行PCR

設(shè)計(jì)S基因特異的引物進(jìn)行PCR

的方法可鑒定重組質(zhì)粒是否插入了S基因。將圖1中含S基因的重組質(zhì)粒用

PacⅠ

PacⅠ

酶切割后，獲得改造后的腺病毒DNA；將其導(dǎo)入A細(xì)胞（A細(xì)胞含有E3基因，可表達(dá)E3蛋白），如圖2所示。腺病毒DNA在A細(xì)胞內(nèi)能夠

復(fù)制并指導(dǎo)腺病毒外殼蛋白的合成

復(fù)制并指導(dǎo)腺病毒外殼蛋白的合成

，從而產(chǎn)生大量重組腺病毒，腺病毒進(jìn)入宿主細(xì)胞后不整合到宿主細(xì)胞染色體上。
（2）綜合上述信息，從生物安全性角度分析重組腺病毒載體的優(yōu)點(diǎn)：

重組腺病毒只能在A細(xì)胞中復(fù)制，即使侵染其他細(xì)胞，也不能復(fù)制；重組腺病毒進(jìn)入宿主細(xì)胞后不整合到宿主細(xì)胞染色體上；腺病毒是人工改造的載體，不含致病基

重組腺病毒只能在A細(xì)胞中復(fù)制，即使侵染其他細(xì)胞，也不能復(fù)制；重組腺病毒進(jìn)入宿主細(xì)胞后不整合到宿主細(xì)胞染色體上；腺病毒是人工改造的載體，不含致病基

（寫出2點(diǎn)）。
（3）用含S基因的重組腺病毒分別感染正常人及糖尿病患者的血管細(xì)胞，使S蛋白在血管細(xì)胞中大量表達(dá)。對(duì)正常人、糖尿病患者及二者轉(zhuǎn)入S基因后血管細(xì)胞中能促進(jìn)細(xì)胞衰老的I蛋白進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果如圖3所示（顏色越深代表表達(dá)量越高）。可用

抗原-抗體雜交

抗原-抗體雜交

方法檢測(cè)I蛋白的表達(dá)量：實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示

糖尿病患者

糖尿病患者

血管細(xì)胞中I蛋白表達(dá)量最高，推測(cè)S蛋白對(duì)高血糖引發(fā)的血管細(xì)胞衰老的作用及機(jī)制是

S蛋白通過降低Ⅰ蛋白的含量，抑制高血糖引發(fā)的血管細(xì)胞衰老

S蛋白通過降低Ⅰ蛋白的含量，抑制高血糖引發(fā)的血管細(xì)胞衰老