為培育轉(zhuǎn)固氮基因的小麥新品種，科研人員利用土壤農(nóng)桿菌的Ti質(zhì)粒和普通質(zhì)粒按如圖構(gòu)建了雙元載體系統(tǒng)（Ti輔助質(zhì)粒和T-DNA給體質(zhì)粒），圖中vir基因編碼產(chǎn)物能激活T-DNA轉(zhuǎn)移，ori為復(fù)制原點，tmr和tms為致瘤基因，LB和RB為T-DNA兩端的重復(fù)序列，kan為卡那霉素抗性基因，ter為四環(huán)素抗性基因。如表是幾種限制酶識別序列及切割位點。請回答下列問題：

限制酶	EcoRⅠ	BamHⅠ	Sau3AⅠ	BclⅠ	SmaⅠ	XmaⅠ
識別序列及切割位點	-G↓AATTC-	-G↓GATCC-	-↓GATC-	-T↓GATCA-	-CCC↓GGG-	-C↓CCGGG-

（1）研究發(fā)現(xiàn)T-DNA的RB序列相當(dāng)保守，是由于該序列的突變類型在

自然選擇

自然選擇

過程中被淘汰。
（2）T-DNA轉(zhuǎn)移至植物細(xì)胞可使植物患“腫瘤”，研究發(fā)現(xiàn)“腫瘤”的發(fā)生與植物激素有關(guān)，據(jù)此推測T-DNA中致瘤基因tmr、tms可能與

生長素、細(xì)胞分裂素

生長素、細(xì)胞分裂素

等植物激素的合成有關(guān)。
（3）為防止植物形成“腫瘤”，研究人員按如圖構(gòu)建了雙元載體系統(tǒng)。圖中過程①需先用限制酶

SmaⅠ和BamHⅠ

SmaⅠ和BamHⅠ

處理Ti質(zhì)粒以去除致瘤基因，再用

T₄DNA連接

T₄DNA連接

酶將經(jīng)過處理的固氮基因接入Ti質(zhì)粒，以構(gòu)建重組質(zhì)粒；過程②用限制酶

EcoRⅠ

EcoRⅠ

處理重組質(zhì)粒，獲得含vir基因的DNA片段和含固氮基因的T-DNA，再經(jīng)過程③、④分別構(gòu)建Ti輔助質(zhì)粒和T-DNA給體質(zhì)粒。圖中過程④可以實現(xiàn)的原因是

A片段兩端的粘性末端相同

A片段兩端的粘性末端相同

。
（4）科研人員用限制酶EcoRⅠ和Sau3AⅠ處理T-DNA給體質(zhì)粒，完全酶切后可以得到含

3

3

條帶的凝膠電泳圖譜。
（5）將構(gòu)建的Ti輔助質(zhì)粒和T﹣DNA給體質(zhì)粒導(dǎo)入通過

感受態(tài)細(xì)胞法（或 Ca²⁺處理）

感受態(tài)細(xì)胞法（或 Ca²⁺處理）

方法處理的土壤農(nóng)桿菌內(nèi)，選擇在含有　

卡那霉素

卡那霉素

的培養(yǎng)基上能形成菌落的土壤農(nóng)桿菌去感染小麥細(xì)胞。該過程中T-DNA給體質(zhì)粒并不含有vir基因，但仍能將轉(zhuǎn)化成功的原因是

Ti輔助質(zhì)粒含有vir基因，其編碼的產(chǎn)物能促進(jìn)T-DNA給體質(zhì)粒中的T-DNA轉(zhuǎn)化成功

Ti輔助質(zhì)粒含有vir基因，其編碼的產(chǎn)物能促進(jìn)T-DNA給體質(zhì)粒中的T-DNA轉(zhuǎn)化成功

。
（6）種植轉(zhuǎn)基因固氮小麥，在環(huán)境保護(hù)上的重要意義有

減少氮肥的使用，減輕環(huán)境污染

減少氮肥的使用，減輕環(huán)境污染

。（答出一點即可）