如圖是某基因工程中構建重組質(zhì)粒的過程示意圖,載體質(zhì)粒P0具有四環(huán)素抗性基因(tetr)和氨芐青霉素抗性基因(ampr)。請回答下列問題:
(1)EcoRⅤ酶切位點為,EcoRⅤ酶切出來的線性載體P1為平平末端。
(2)用TaqDNA聚合酶進行PCR擴增獲得目的基因片段,其兩端各自帶有一個腺嘌呤脫氧核苷酸,載體P1用酶處理,在兩端各添加了一個堿基為胸腺嘧啶胸腺嘧啶的脫氧核苷酸,形成P2,P2和目的基因片段在DNA連接DNA連接酶作用下,形成重組質(zhì)粒P3.PCR技術中,使用的DNA聚合酶不同于一般生物體內(nèi)的DNA聚合酶,其最主要的特點是耐高溫耐高溫。
(3)PCR技術可以臨床用于診斷感染性疾病、腫瘤及遺傳病等,它是一種用于放大擴增特定的DNA片段的分子生物學技術,其標準步驟為變性變性、退火、延伸延伸。
(4)重組質(zhì)粒中抗生素抗性基因的作用是為了鑒別和篩選含目的基因的細胞鑒別和篩選含目的基因的細胞。若該目的基因是從cDNA文庫中分離獲取的蔗糖轉(zhuǎn)運蛋白基因,將重組質(zhì)粒導入喪失吸收蔗糖能力的大腸桿菌突變體中,然后在蔗糖蔗糖為唯一含碳營養(yǎng)物質(zhì)的培養(yǎng)基中培養(yǎng),以完成目的基因表達的初步檢測。
【考點】基因工程的操作過程綜合.
【答案】平;胸腺嘧啶;DNA連接;耐高溫;變性;延伸;鑒別和篩選含目的基因的細胞;蔗糖
【解答】
【點評】
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