淀粉是食物的重要成分，也是一種重要的工業(yè)原料，其水解產(chǎn)物廣泛用于糖類及酒精發(fā)酵等行業(yè)。目前，工廠化水解淀粉需在高溫條件下進(jìn)行，因此開(kāi)發(fā)具有自主產(chǎn)權(quán)的耐熱性α-淀粉酶并實(shí)現(xiàn)大規(guī)模生產(chǎn)，對(duì)我國(guó)淀粉深加工產(chǎn)業(yè)的發(fā)展具有重要意義。為了實(shí)現(xiàn)α-淀粉酶的高效表達(dá)和分泌，我國(guó)科研人員以芽孢桿菌構(gòu)建工程菌開(kāi)展研究。
回答下列問(wèn)題：
（1）科研人員從某熱泉的細(xì)菌中發(fā)現(xiàn)一種α-淀粉酶（AmyS1），利用蛋白質(zhì)工程對(duì)其進(jìn)行改造，獲得了具有更高熱穩(wěn)定性和催化效率的重組耐高溫α-淀粉酶（AmyS2）。其基本操作流程是

⑤⑥③②⑧

⑤⑥③②⑧

（從下列操作或思路中，選擇正確的序號(hào)并排序）
①人工合成AmyS1基因
②人工合成AmyS2基因
③分子設(shè)計(jì)目標(biāo)蛋白的氨基酸序列
④預(yù)期AmyS1功能
⑤預(yù)期AmyS2功能
⑥設(shè)計(jì)目標(biāo)蛋白的三維結(jié)構(gòu)
⑦將獲得的基因?qū)胧荏w細(xì)胞生產(chǎn)AmyS1
⑧將獲得的基因?qū)胧荏w細(xì)胞生產(chǎn)AmyS2
（2）獲取AmyS2基因后，構(gòu)建基因表達(dá)載體的過(guò)程如圖1所示。該過(guò)程中，將目的基因與原始質(zhì)粒A構(gòu)建成質(zhì)粒B，應(yīng)選擇的限制酶是

NdeⅠ和EcoRⅠ

NdeⅠ和EcoRⅠ

；將質(zhì)粒B與信號(hào)肽基因構(gòu)建成質(zhì)粒C，應(yīng)選擇的限制酶是

MluⅠ和Eco52Ⅰ

MluⅠ和Eco52Ⅰ

。

（3）信號(hào)肽是一段能夠引導(dǎo)目標(biāo)蛋白質(zhì)分泌到細(xì)胞外的肽鏈。據(jù)此推測(cè)，與質(zhì)粒B相比，在工業(yè)生產(chǎn)中使用導(dǎo)入質(zhì)粒C的工程菌生產(chǎn)α-淀粉酶的優(yōu)勢(shì)是

芽孢桿菌可以將α-淀粉酶分泌到細(xì)胞外，便于從培養(yǎng)液中提取產(chǎn)物

芽孢桿菌可以將α-淀粉酶分泌到細(xì)胞外，便于從培養(yǎng)液中提取產(chǎn)物

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（4）研究發(fā)現(xiàn)，芽孢桿菌會(huì)分泌一種胞外蛋白酶（控制其合成的基因是bcp），導(dǎo)致胞外α-淀粉酶被降解。請(qǐng)從改造工程菌的角度提出一條解決該問(wèn)題的思路

用敲除了bcp基因（或抑制bcp基因的表達(dá)）的芽孢桿菌作為工程菌生產(chǎn)AmyS2

用敲除了bcp基因（或抑制bcp基因的表達(dá)）的芽孢桿菌作為工程菌生產(chǎn)AmyS2

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（5）檢測(cè)獲得的α-淀粉酶的特性，結(jié)果如圖所示。在工廠化生產(chǎn)中，利用該酶水解淀粉時(shí)，應(yīng)設(shè)置的溫度是

90（或“90～100”）

90（或“90～100”）

℃，理由是

α-淀粉酶在90℃（或“90～100℃”）時(shí)相對(duì)酶活性和熱穩(wěn)定性均較高

α-淀粉酶在90℃（或“90～100℃”）時(shí)相對(duì)酶活性和熱穩(wěn)定性均較高

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