番茄紅素是類胡蘿卜素的一種，存在于番茄、西瓜等水果及一些蔬菜中，是目前自然界中存在的抗氧化、抗衰老和預(yù)防腫瘤能力最強(qiáng)的物質(zhì)之一，經(jīng)研究發(fā)現(xiàn)合成番茄紅素的功能基因是CrtE、CrtB與Crtl。為解決植物提取法產(chǎn)量低的問題，研究人員試通過基因工程技術(shù)來(lái)獲得大量的番茄紅素。請(qǐng)回答下列問題：
（1）為提高轉(zhuǎn)化效率，研究者根據(jù)CrtE、CrtB與Crtl基因序列及其蛋白產(chǎn)物等，將三個(gè)基因優(yōu)化設(shè)計(jì)為CrtEBI基因，并通過 化學(xué)（人工）化學(xué)（人工）法獲得了該基因。為了使目的基因能與表達(dá)載體正確連接，需在目的基因的兩端加上 合成兩種不同限制酶識(shí)別序列合成兩種不同限制酶識(shí)別序列。
（2）利用 （兩種不同）限制酶與DNA連接酶（兩種不同）限制酶與DNA連接酶酶將含有CrtEBI基因的DNA片段與質(zhì)粒pTRC99a相連。使用CaCl2處理大腸桿菌，使細(xì)胞處于一種 能吸收周圍環(huán)境中DNA分子能吸收周圍環(huán)境中DNA分子的生理狀態(tài)，進(jìn)而將重組表達(dá)載體倒入其中。
（3）待培養(yǎng)12h后，挑取單菌落進(jìn)行PCR驗(yàn)證以確定受體細(xì)胞是否被成功導(dǎo)入目的基因。若擴(kuò)增后的DNA樣品電泳結(jié)果如圖1，則圖2（深色部分為目的基因區(qū)段）中對(duì)應(yīng)泳道1和泳道2的引物組合分別為 3、43、4和 1、21、2。（填序號(hào)）
【考點(diǎn)】基因工程的操作過程綜合．
【答案】化學(xué)（人工）；合成兩種不同限制酶識(shí)別序列；（兩種不同）限制酶與DNA連接酶；能吸收周圍環(huán)境中DNA分子；3、4；1、2
【解答】
【點(diǎn)評(píng)】
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發(fā)布：2024/5/10 8:0:9組卷：1引用：1難度：0.5
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1．下列有關(guān)基因工程技術(shù)和蛋白質(zhì)工程技術(shù)敘述正確的是（ ?。?/h2>
發(fā)布：2025/1/5 8:0:1組卷：6引用：1難度：0.7 -
2．幾丁質(zhì)是許多真菌細(xì)胞壁的重要成分，幾丁質(zhì)酶可催化幾丁質(zhì)水解。通過基因工程將幾丁質(zhì)酶基因轉(zhuǎn)入植物體內(nèi)，可增強(qiáng)其抗真菌病的能力。回答下列問題：
（1）基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以從基因文庫(kù)中獲得?；蛭膸?kù)包括和。
（2）生物體細(xì)胞內(nèi)的DNA復(fù)制開始時(shí)，解開DNA雙鏈的酶是。在體外利用PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因時(shí)，使反應(yīng)體系中的模板DNA解鏈為單鏈的條件是。上述兩個(gè)解鏈過程的共同點(diǎn)是破壞了DNA雙鏈分子中的。
（3）DNA連接酶是將兩個(gè)DNA片段連接起來(lái)的酶，常見的有和，其中既能連接黏性末端又能連接平末端的是。當(dāng)幾丁質(zhì)酶基因和質(zhì)粒載體連接時(shí)，DNA連接酶催化形成的化學(xué)鍵是。
（4）提取RNA時(shí)，提取液中需添加RNA酶抑制劑，其目的是。
（5）若獲得的轉(zhuǎn)基因植株（幾丁質(zhì)酶基因已經(jīng)整合到植物的基因組中）抗真菌病的能力沒有提高，根據(jù)中心法則分析，其可能的原因是。發(fā)布：2025/1/5 8:0:1組卷：2引用：2難度：0.6 -
3．下列有關(guān)基因工程的敘述，正確的是（ ?。?/h2>
發(fā)布：2024/12/31 5:0:5組卷：3引用：2難度：0.7
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