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Cre酶是一種重組酶,LoxP是能被Cre酶識(shí)別的特異DNA序列。Cre/LoxP重組酶系統(tǒng)能夠?qū)崿F(xiàn)特異位點(diǎn)的基因敲除、基因插入等操作。
(1)一般而言,當(dāng)一條DNA鏈上存在兩個(gè)相同的LoxP序列且方向相同時(shí),Cre酶能有效切除兩個(gè)位點(diǎn)間的DNA序列,如圖1所示。
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①Cre酶與限制酶的功能類似,能將特定部位的兩個(gè)核苷酸之間的
磷酸二酯鍵
磷酸二酯鍵
斷開。
②在無Cre酶存在的細(xì)胞中,轉(zhuǎn)錄終止信號(hào)序列抑制下游GFP基因起作用,無法發(fā)出熒光。若細(xì)胞中含有Cre酶,Cre酶就會(huì)
切除轉(zhuǎn)錄終止信號(hào)序列
切除轉(zhuǎn)錄終止信號(hào)序列
,GFP基因就會(huì)
轉(zhuǎn)錄和翻譯(或“表達(dá)“)
轉(zhuǎn)錄和翻譯(或“表達(dá)“)
,合成綠色熒光蛋白。
(2)當(dāng)細(xì)胞中存在多對(duì)Cre酶識(shí)別位點(diǎn)和熒光基因時(shí),只有在啟動(dòng)子之后且與啟動(dòng)子相鄰的熒光蛋白基因才會(huì)表達(dá),借助大腦成像技術(shù),通過熒光蛋白“點(diǎn)亮”大腦內(nèi)的神經(jīng)元,小鼠不同的腦組織細(xì)胞就會(huì)呈現(xiàn)不同的顏色,出現(xiàn)“腦彩虹”。
①研究者利用
限制酶和DNA連接
限制酶和DNA連接
酶構(gòu)建了含有熒光蛋白基因和Cre酶識(shí)別序列的基因表達(dá)載體(如圖2),利用
顯微注射
顯微注射
法將其導(dǎo)入小鼠細(xì)胞中,進(jìn)而培育出轉(zhuǎn)基因小鼠。
②若該小鼠腦細(xì)胞中不存在Cre酶,小鼠腦組織呈現(xiàn)的色彩為
綠色
綠色
。
③若該小鼠腦細(xì)胞中存在Cre酶時(shí),該小鼠一個(gè)腦細(xì)胞的色彩為
綠色或紅色或黃色或藍(lán)色
綠色或紅色或黃色或藍(lán)色
。
(3)兩個(gè)LoxP序列位于一條DNA鏈上且方向相反時(shí),Cre酶能誘導(dǎo)兩個(gè)LoxP位點(diǎn)間的序列翻轉(zhuǎn)。請(qǐng)?jiān)趫D3中畫出僅通過序列翻轉(zhuǎn)就能在腦組織中同時(shí)呈現(xiàn)四種顏色的基因表達(dá)載體模式圖(用最少的LoxP序列)。

【考點(diǎn)】基因工程的操作過程綜合
【答案】磷酸二酯鍵;切除轉(zhuǎn)錄終止信號(hào)序列;轉(zhuǎn)錄和翻譯(或“表達(dá)“);限制酶和DNA連接;顯微注射;綠色;綠色或紅色或黃色或藍(lán)色
【解答】
【點(diǎn)評(píng)】
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發(fā)布:2024/4/20 14:35:0組卷:17引用:1難度:0.6
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  • 1.下列有關(guān)基因工程技術(shù)和蛋白質(zhì)工程技術(shù)敘述正確的是( ?。?/h2>

    發(fā)布:2025/1/5 8:0:1組卷:6引用:1難度:0.7
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    發(fā)布:2024/12/31 5:0:5組卷:3引用:2難度:0.7
  • 3.幾丁質(zhì)是許多真菌細(xì)胞壁的重要成分,幾丁質(zhì)酶可催化幾丁質(zhì)水解。通過基因工程將幾丁質(zhì)酶基因轉(zhuǎn)入植物體內(nèi),可增強(qiáng)其抗真菌病的能力?;卮鹣铝袉栴}:
    (1)基因工程中所用的目的基因可以人工合成,也可以從基因文庫中獲得?;蛭膸彀?
     
     
    。
    (2)生物體細(xì)胞內(nèi)的DNA復(fù)制開始時(shí),解開DNA雙鏈的酶是
     
    。在體外利用PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因時(shí),使反應(yīng)體系中的模板DNA解鏈為單鏈的條件是
     
    。上述兩個(gè)解鏈過程的共同點(diǎn)是破壞了DNA雙鏈分子中的
     
    。
    (3)DNA連接酶是將兩個(gè)DNA片段連接起來的酶,常見的有
     
     
    ,其中既能連接黏性末端又能連接平末端的是
     
    。當(dāng)幾丁質(zhì)酶基因和質(zhì)粒載體連接時(shí),DNA連接酶催化形成的化學(xué)鍵是
     
    。
    (4)提取RNA時(shí),提取液中需添加RNA酶抑制劑,其目的是
     

    (5)若獲得的轉(zhuǎn)基因植株(幾丁質(zhì)酶基因已經(jīng)整合到植物的基因組中)抗真菌病的能力沒有提高,根據(jù)中心法則分析,其可能的原因是
     
    。

    發(fā)布:2025/1/5 8:0:1組卷:2引用:2難度:0.6
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