黨的二十大對保障糧食安全提出了更高要求，馬鈴薯是我國重要的糧食作物之一。致病疫霉導致的晚疫病及干旱、高低溫和鹽脅迫等是導致馬鈴薯減產的重要原因。研究人員為探究StNPR4和tproNPR4基因在馬鈴薯應對致病疫霉和高鹽脅迫中的功能進行了相關實驗，基因表達載體構建示意圖如圖1。
（1）用SacⅡ等限制酶切割含目的基因的DNA片段，與經相同酶切割后的pENTR-L16質粒用 DNA連接DNA連接酶連接，構建重組pENTR-L16。
（2）經 SaclI和Kpn1SaclI和Kpn1酶將含目的基因的片段切出并連接到載體pORE04上構建重組pORE04。
（3）將重組pORE04導入馬鈴薯細胞常用的方法是 農桿菌轉化農桿菌轉化法，它利用了T-DNA的 可轉移可轉移特性，最終使目的基因整合到馬鈴薯細胞上。經轉化后得到5個品系，命名為1、2、3、4和5。圖2A表示馬鈴薯基因相對表達量分析，圖2B表示馬鈴薯接種致病疫霉后病原菌相對生物量分析，圖2C表示150mmol?L-1的NaCl處理對馬鈴薯快繁生根率的影響，**表示組別間差異達到極顯著水平。
①據(jù)圖2A分析，只有轉基因品系 55的表達量顯著低于野生型（WT）和其余4個轉化品系，因此后續(xù)試驗不再檢測此品系。
②據(jù)圖2B和圖2C分析，與野生型馬鈴薯比較，轉基因馬鈴薯品系的優(yōu)勢是具有 抗病性抗病性，致病疫霉相對生物量低：生根率高，存活能力強存活能力強。
（4）為研究轉基因馬鈴薯植株的分子機理，研究人員利用Taqman探針和反轉錄PCR技術，對轉基因馬鈴薯StproNPR4和StNPR4基因的表達進行檢測：
采用PCR技術獲取和擴增StproNPR4基因，需要使用的引物2序列為5'-CTTGGATGAT-3'，則引物1的序列為 5'-TCTGTT-3'5'-TCTGTT-3'（標出5'和3端，寫出前6個堿基即可）。
②Tagman探針的結構如圖3所示，由于探針有 堿基互補配對堿基互補配對的片段，導致游離探針上的熒光素會與淬滅劑結合無法發(fā)出熒光。在PCR過程中，Taq酶體現(xiàn)出 DNA聚合DNA聚合酶活性，在相同擴增時間中，總熒光值與待測基因的mRNA（轉錄）量mRNA（轉錄）量成正比。
③經檢測，轉基因馬鈴薯水楊酸（SA）信號通路相關蛋白基因表達量顯著上升，SA是一種植物抗病有關的調節(jié)物質。研究人員推測L儀器檢測通過激活SA途徑提升抗病能力，欲驗證這一假設，需要進行的實驗是 敲除SA受體基因或抑制SA信號途徑，檢測馬鈴薯的抗病情況敲除SA受體基因或抑制SA信號途徑，檢測馬鈴薯的抗病情況。
【考點】基因工程的操作過程綜合．
【答案】DNA連接；SaclI和Kpn1；農桿菌轉化；可轉移；5；抗病性；存活能力強；5'-TCTGTT-3'；堿基互補配對；DNA聚合；mRNA（轉錄）量；敲除SA受體基因或抑制SA信號途徑，檢測馬鈴薯的抗病情況
【解答】
【點評】
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發(fā)布：2024/6/21 8:0:10組卷：15引用：1難度：0.5
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1．下列有關基因工程技術和蛋白質工程技術敘述正確的是（ ）
發(fā)布：2025/1/5 8:0:1組卷：6引用：1難度：0.7 -
2．下列有關基因工程的敘述，正確的是（ ?。?/h2>
發(fā)布：2024/12/31 5:0:5組卷：3引用：2難度：0.7 -
3．幾丁質是許多真菌細胞壁的重要成分，幾丁質酶可催化幾丁質水解。通過基因工程將幾丁質酶基因轉入植物體內，可增強其抗真菌病的能力?；卮鹣铝袉栴}：
（1）基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以從基因文庫中獲得。基因文庫包括和。
（2）生物體細胞內的DNA復制開始時，解開DNA雙鏈的酶是。在體外利用PCR技術擴增目的基因時，使反應體系中的模板DNA解鏈為單鏈的條件是。上述兩個解鏈過程的共同點是破壞了DNA雙鏈分子中的。
（3）DNA連接酶是將兩個DNA片段連接起來的酶，常見的有和，其中既能連接黏性末端又能連接平末端的是。當幾丁質酶基因和質粒載體連接時，DNA連接酶催化形成的化學鍵是。
（4）提取RNA時，提取液中需添加RNA酶抑制劑，其目的是。
（5）若獲得的轉基因植株（幾丁質酶基因已經整合到植物的基因組中）抗真菌病的能力沒有提高，根據(jù)中心法則分析，其可能的原因是。發(fā)布：2025/1/5 8:0:1組卷：2引用：2難度：0.6
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