定點誘變技術可以在體外改造目的DNA分子，進而研究基因的表達以及蛋白質的結構與功能之間的關系。經典的大引物PCR定點誘變技術成為基于PCR的定點誘變技術中應用最普遍的方法，操作過程如圖甲。研究者欲改造某基因并將其導入大腸桿菌的質粒中保存，該質粒含有氨芐青霉素抗性基因、LacZ基因及一些酶切位點，結構如圖乙?；卮鹣铝袉栴}：
（1）利用大引物PCR進行定點誘變需要進行兩輪PCR（PCR1和PCR2），在PCR1中，至少需要 22個循環(huán)才能獲得相應的大引物模板。在PCR2中，要獲得帶有誘變點的改良基因，引物應選用大引物兩條鏈中的 ②②（填“①或“②”）。
（2）為實現質粒和改良基因的高效連接，選用限制酶XmaⅠ而不選用限制酶SmaⅠ的原因是 SmaⅠ的酶切末端為平末端，無法與改良基因上的黏性末端連接SmaⅠ的酶切末端為平末端，無法與改良基因上的黏性末端連接。為將改良基因構建在質粒上，還需要 BglⅡ、DNA連接酶BglⅡ、DNA連接酶等酶。
（3）在構建改良基因表達載體時，有的質粒含有改良基因，有的質粒為空白質粒，將含上述組件的溶液加入到大腸桿菌菌液中，適宜溫度下培養(yǎng)一段時間后，再將菌液涂布在含氨芐青霉素和 β-半乳糖苷β-半乳糖苷的平板上。一段時間后，在培養(yǎng)基上出現白色和藍色兩種菌落，其中白色菌落含有重組質粒，判斷的依據是 構建改良基因重組質粒時破壞了LacZ基因，含該質粒的大腸桿菌不能分解3-半乳糖苷產生藍色物質，菌落為白色構建改良基因重組質粒時破壞了LacZ基因，含該質粒的大腸桿菌不能分解3-半乳糖苷產生藍色物質，菌落為白色。
（4）與X射線誘變相比，該誘變技術的優(yōu)點是 目的性強、突變頻率高目的性強、突變頻率高。
【考點】基因工程的操作過程綜合；DNA片段的擴增與電泳鑒定．
【答案】2；②；SmaⅠ的酶切末端為平末端，無法與改良基因上的黏性末端連接；BglⅡ、DNA連接酶；β-半乳糖苷；構建改良基因重組質粒時破壞了LacZ基因，含該質粒的大腸桿菌不能分解3-半乳糖苷產生藍色物質，菌落為白色；目的性強、突變頻率高
【解答】
【點評】
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發(fā)布：2024/5/11 8:0:9組卷：31引用：2難度：0.5
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1．下列有關基因工程技術和蛋白質工程技術敘述正確的是（ ?。?/h2>
發(fā)布：2025/1/5 8:0:1組卷：6引用：1難度：0.7 -
2．下列有關基因工程的敘述，正確的是（ ?。?/h2>
發(fā)布：2024/12/31 5:0:5組卷：3引用：2難度：0.7 -
3．幾丁質是許多真菌細胞壁的重要成分，幾丁質酶可催化幾丁質水解。通過基因工程將幾丁質酶基因轉入植物體內，可增強其抗真菌病的能力?；卮鹣铝袉栴}：
（1）基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以從基因文庫中獲得。基因文庫包括和。
（2）生物體細胞內的DNA復制開始時，解開DNA雙鏈的酶是。在體外利用PCR技術擴增目的基因時，使反應體系中的模板DNA解鏈為單鏈的條件是。上述兩個解鏈過程的共同點是破壞了DNA雙鏈分子中的。
（3）DNA連接酶是將兩個DNA片段連接起來的酶，常見的有和，其中既能連接黏性末端又能連接平末端的是。當幾丁質酶基因和質粒載體連接時，DNA連接酶催化形成的化學鍵是。
（4）提取RNA時，提取液中需添加RNA酶抑制劑，其目的是。
（5）若獲得的轉基因植株（幾丁質酶基因已經整合到植物的基因組中）抗真菌病的能力沒有提高，根據中心法則分析，其可能的原因是。發(fā)布：2025/1/5 8:0:1組卷：2引用：2難度：0.6