已知組成型啟動(dòng)子可以高效地啟動(dòng)目的基因在植物各種組織中的表達(dá)，但常會(huì)阻礙植物的生長(zhǎng)發(fā)育。誘導(dǎo)型啟動(dòng)子可在特定環(huán)境條件下誘導(dǎo)目的基因的表達(dá)。沙冬青脫水素基因（AmDHN基因）能使植株具有較強(qiáng)的抗旱作用?？蒲腥藛T通過構(gòu)建AmDHN基因表達(dá)載體，以培育耐旱苜蓿新品種，所用載體如圖1所示，請(qǐng)回答下列問題：
| 限制酶 | Be1Ⅰ | SacⅠ | BamHⅠ | PstⅠ | SmaⅠ |
| 識(shí)別序列和酶切位點(diǎn) | T↓GATCA | GAGCT↓C | G↓GATCC | CTGCA↓G | CCC↓GGG |
組成型
組成型
啟動(dòng)子。（2）如表是科研人員擴(kuò)增Rd29A啟動(dòng)子所設(shè)計(jì)的引物，根據(jù)引物的堿基序列及限制酶的識(shí)別序列分析，構(gòu)建載體2時(shí)選用的限制酶是
SacⅠ和SmaⅠ
SacⅠ和SmaⅠ
。為了改造載體1中的啟動(dòng)子，需要用 BclⅠ和SacⅠ
BclⅠ和SacⅠ
酶切割載體1、2為最佳。| 上游引物P1：5'-GACCCGGGTTTCCAAAGATTTTTTTC-3' 下游引物P2：5'-GAGAGCTCTGGGGTTTTGCTTTTGAATGT-3' |
農(nóng)桿菌
農(nóng)桿菌
，再轉(zhuǎn)化苜蓿。轉(zhuǎn)化后應(yīng)在培養(yǎng)基中添加 新霉素
新霉素
進(jìn)行篩選。（4）為檢測(cè)轉(zhuǎn)基因苜蓿中AmDHN基因的表達(dá)水平，科研人員做了相關(guān)實(shí)驗(yàn)。如表呈現(xiàn)了部分操作步驟，請(qǐng)完成表格：
| 實(shí)驗(yàn)步驟的目的 | 簡(jiǎn)要操作過程 |
| ① 使幼苗適應(yīng)外界的自然環(huán)境（進(jìn)行煉苗）材料處理 使幼苗適應(yīng)外界的自然環(huán)境（進(jìn)行煉苗）材料處理 |
在轉(zhuǎn)基因無菌苗根系長(zhǎng)至 2～3 cm 時(shí)，將培養(yǎng)無菌苗三角瓶的封口膜打開，培養(yǎng)一周，觀察其生長(zhǎng)狀況 |
| 提供適宜生長(zhǎng)條件 | 將甲組幼苗根系置于300mL水中 |
| 模擬干旱脅迫條件 | ② 將乙組幼苗根系置于等量的20%PEG溶液中 將乙組幼苗根系置于等量的20%PEG溶液中 |
| 無關(guān)變量控制 | 將甲、乙兩組置于溫度、光照等條件適宜且相同的環(huán)境中培養(yǎng)8h,之后剪取兩組葉片放在液氮中儲(chǔ)存 |
| ③ 檢測(cè)PCR擴(kuò)增產(chǎn)物量，估算目的基因的表達(dá)量 檢測(cè)PCR擴(kuò)增產(chǎn)物量，估算目的基因的表達(dá)量 |
對(duì)葉片研磨、離心后，提取④ （總）RNA （總）RNA ，以AmDHN和MtActin基因⑤兩端脫氧核苷酸序列 兩端脫氧核苷酸序列 為依據(jù)設(shè)計(jì)引物，進(jìn)行RT-PCR擴(kuò)增，其中MtActin（一種細(xì)胞骨架蛋白）為內(nèi)參。擴(kuò)增產(chǎn)物用⑥瓊脂糖凝膠電泳 瓊脂糖凝膠電泳 檢測(cè)，EB（溴化乙錠）染色照相如圖。 |
【考點(diǎn)】基因工程的操作過程綜合．
【答案】組成型；SacⅠ和SmaⅠ；BclⅠ和SacⅠ；農(nóng)桿菌；新霉素；使幼苗適應(yīng)外界的自然環(huán)境（進(jìn)行煉苗）材料處理；將乙組幼苗根系置于等量的20%PEG溶液中；檢測(cè)PCR擴(kuò)增產(chǎn)物量，估算目的基因的表達(dá)量；（總）RNA；兩端脫氧核苷酸序列；瓊脂糖凝膠電泳
【解答】
【點(diǎn)評(píng)】
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發(fā)布：2024/8/3 8:0:9組卷：11引用：1難度：0.6
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1．下列有關(guān)基因工程技術(shù)和蛋白質(zhì)工程技術(shù)敘述正確的是（ ?。?/h2>
發(fā)布：2025/1/5 8:0:1組卷：6引用：1難度：0.7 -
2．下列有關(guān)基因工程的敘述，正確的是（ ?。?/h2>
發(fā)布：2024/12/31 5:0:5組卷：3引用：2難度：0.7 -
3．幾丁質(zhì)是許多真菌細(xì)胞壁的重要成分，幾丁質(zhì)酶可催化幾丁質(zhì)水解。通過基因工程將幾丁質(zhì)酶基因轉(zhuǎn)入植物體內(nèi)，可增強(qiáng)其抗真菌病的能力?；卮鹣铝袉栴}：
（1）基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以從基因文庫(kù)中獲得?；蛭膸?kù)包括和。
（2）生物體細(xì)胞內(nèi)的DNA復(fù)制開始時(shí)，解開DNA雙鏈的酶是。在體外利用PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因時(shí)，使反應(yīng)體系中的模板DNA解鏈為單鏈的條件是。上述兩個(gè)解鏈過程的共同點(diǎn)是破壞了DNA雙鏈分子中的。
（3）DNA連接酶是將兩個(gè)DNA片段連接起來的酶，常見的有和，其中既能連接黏性末端又能連接平末端的是。當(dāng)幾丁質(zhì)酶基因和質(zhì)粒載體連接時(shí)，DNA連接酶催化形成的化學(xué)鍵是。
（4）提取RNA時(shí)，提取液中需添加RNA酶抑制劑，其目的是。
（5）若獲得的轉(zhuǎn)基因植株（幾丁質(zhì)酶基因已經(jīng)整合到植物的基因組中）抗真菌病的能力沒有提高，根據(jù)中心法則分析，其可能的原因是。發(fā)布：2025/1/5 8:0:1組卷：2引用：2難度：0.6