腸道病毒EV71是RNA病毒，其表面蛋白為VP1～VP4，分別由V1～V4基因控制。為研究VP1～VP4的抗原性，從中篩選出EV71的疫苗抗原，研究人員利用基因工程技術(shù)生產(chǎn)了上述4種蛋白質(zhì)。如圖是制備V1基因表達(dá)載體的過程示意圖，請(qǐng)回答下列問題：
gus：控制合成的酶使β-葡萄糖苷酸水解為藍(lán)色物質(zhì)
Kan：卡那霉素抗性基因
（1）以RNA為模板，通過4組RT-PCR可分別獲取V1～V4基因（DNA）。RT-PCR所需要的酶有 逆轉(zhuǎn)錄酶和Taq酶逆轉(zhuǎn)錄酶和Taq酶，該過程中子鏈延伸時(shí)所需的能量較為特殊，一般來自 dNTPdNTP。
（2）為方便目的基因與質(zhì)粒的連接，通常將限制酶的切點(diǎn)設(shè)計(jì)在引物上。引物一般為單鏈DNA，新合成子鏈的延伸方向?yàn)?′→3′。PCR獲取V1基因時(shí)，10引物中限制酶切點(diǎn)的堿基序列應(yīng)設(shè)計(jì)為上游引物3′…GGATCCGGATCC…5′，下游引物3′…CTCGAGCTCGAG…5′。
（3）用相關(guān)限制酶處理質(zhì)粒和V1基因后，再與 DNA連接DNA連接酶混合，加入大腸桿菌溫育。一段時(shí)間后，將菌液涂布在含有 β—葡萄糖苷酸β—葡萄糖苷酸和 卡那霉素卡那霉素的平板上，經(jīng)培養(yǎng)，在平板上長(zhǎng)出白色和藍(lán)色兩種菌落，其中 白色白色菌落含有V1基因表達(dá)載體，判斷依據(jù)是 構(gòu)建目的基因表達(dá)載體時(shí)切除了gus含基因，在含β—葡萄糖苷酸的培養(yǎng)基上，含重組V1基因質(zhì)粒的大腸桿菌不顯藍(lán)色構(gòu)建目的基因表達(dá)載體時(shí)切除了gus含基因，在含β—葡萄糖苷酸的培養(yǎng)基上，含重組V1基因質(zhì)粒的大腸桿菌不顯藍(lán)色。
【考點(diǎn)】DNA片段的擴(kuò)增與電泳鑒定．
【答案】逆轉(zhuǎn)錄酶和Taq酶；dNTP；GGATCC；CTCGAG；DNA連接；β—葡萄糖苷酸；卡那霉素；白色；構(gòu)建目的基因表達(dá)載體時(shí)切除了gus含基因，在含β—葡萄糖苷酸的培養(yǎng)基上，含重組V1基因質(zhì)粒的大腸桿菌不顯藍(lán)色
【解答】
【點(diǎn)評(píng)】
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發(fā)布：2024/6/27 10:35:59組卷：10引用：1難度：0.6
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1．數(shù)字PCR技術(shù)是一種核酸分子絕對(duì)定量技術(shù)，其原理如圖所示。下列有關(guān)敘述正確的是（ ）
發(fā)布：2024/12/30 23:30:2組卷：6引用：2難度：0.6 -
2．PCR技術(shù)不僅可以擴(kuò)增目的基因，還可用于定點(diǎn)誘變目的基因等。大引物PCR就是一種定點(diǎn)突變技術(shù)。大引物PCR需要用到引物進(jìn)行兩次PCR，其操作步驟為：
①根據(jù)目的基因序列設(shè)計(jì)引物，得到兩個(gè)常規(guī)引物，分別為常規(guī)上游引物和常規(guī)下游引物；
②根據(jù)突變堿基所處序列位置設(shè)計(jì)突變上游引物，突變位點(diǎn)位于突變引物序列的中間位置
③由突變上游引物與常規(guī)下游引物進(jìn)行第一次PCR反應(yīng)得到下游大引物；
④用得到的下游大引物中和另一個(gè)常規(guī)上游引物進(jìn)行第二次PCR擴(kuò)增，得到突變目的基因序列。回答下列問題：
（1）PCR擴(kuò)增的第一步是使雙鏈模板DNA變性。DNA中G+C的含量與變性要求的溫度有關(guān)，DNA中G+C的含量越多，要求的變性溫度越高。其原因是。該P(yáng)CR擴(kuò)增技術(shù)所需的基本條件是種引物、原料、模板、。
（2）在第一次PCR反應(yīng)中，形成圖示雙鏈DNA至少要經(jīng)過次復(fù)制。第一次PCR的產(chǎn)物DNA的條鏈作為第二次PCR所用的引物。與X射線誘變相比，該突變技術(shù)的優(yōu)點(diǎn)是。
（3）如果要利用微生物進(jìn)一步克隆PCR定點(diǎn)誘變產(chǎn)物，其步驟包括：、、微生物的篩選和培養(yǎng)、從菌群中獲取更多目的基因。將獲取目的基因和質(zhì)粒進(jìn)行連接后，需先用處理農(nóng)桿菌以便將基因表達(dá)載體導(dǎo)入馬鈴薯細(xì)胞，將馬鈴薯細(xì)胞培養(yǎng)成幼苗時(shí)經(jīng)過的兩個(gè)過程是。檢測(cè)目的基因是否在馬鈴薯細(xì)胞中轉(zhuǎn)錄出了mRNA，所采用的方法是。發(fā)布：2024/12/30 23:0:2組卷：32引用：3難度：0.6 -
3．下列關(guān)于DNA片段擴(kuò)增及其鑒定的說法錯(cuò)誤的是（ ）
發(fā)布：2024/12/30 23:30:2組卷：3引用：3難度：0.7
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