某抗膜蛋白治療性抗體藥物研發(fā)過程中，需要表達N蛋白胞外段，制備相應(yīng)的單克隆抗體，增加其對N蛋白胞外段特異性結(jié)合的能力。N蛋白胞外段單克隆抗體制備流程如圖1：
（1）用N蛋白胞外段作為抗原對小鼠進行免疫后，取小鼠腺組織用 機械機械方法或 胰蛋白胰蛋白酶處理，制成細胞懸液，置于含有 95%空氣和5%的CO295%空氣和5%的CO2氣體的CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，離心收集小鼠的B淋巴細胞，與骨髓瘤細胞進行融合。
（2）用選擇性培養(yǎng)基對融合后的細胞進行篩選，獲得雜交瘤細胞，將其接種到96孔板，進行 克隆化克隆化培養(yǎng)。用 抗原一抗體雜交抗原一抗體雜交技術(shù)檢測每孔中的抗體，篩選既能產(chǎn)生N蛋白胞外段抗體，又能大量增殖的單克隆雜交瘤細胞株，經(jīng)體外擴大培養(yǎng)，收集 細胞培養(yǎng)液細胞培養(yǎng)液，提取單克隆抗體。
（3）利用上述流程制備的N蛋白胞外段抗體能準確識別 抗原抗原的細微差異，與之發(fā)生特異性結(jié)合，并可 大量制備大量制備，因此被廣泛用作診斷試劑。
（4）利用小鼠制備的抗體是鼠源抗體，鼠源抗體具有外源性，會被人體免疫系統(tǒng)當作抗原而清除（稱為人抗鼠抗體反應(yīng)即HAMA反應(yīng)）?？贵w結(jié)構(gòu)示意圖如圖2，引起HAMA反應(yīng)的主要是“C區(qū)”，通過制備人鼠嵌合抗體可以解決HAMA反應(yīng)。現(xiàn)利用重組DNA技術(shù)可以制備人鼠嵌合抗體，請寫出簡要制備思路：將異源單抗的輕、重鏈可變區(qū)基因插入含有人抗體恒定區(qū)的基因中，并構(gòu)建基因表達載體，利用顯微注射技術(shù)將表達載體導(dǎo)入哺乳動物細胞中，表達出嵌合抗體將異源單抗的輕、重鏈可變區(qū)基因插入含有人抗體恒定區(qū)的基因中，并構(gòu)建基因表達載體，利用顯微注射技術(shù)將表達載體導(dǎo)入哺乳動物細胞中，表達出嵌合抗體。
（5）為了進一步減少免疫排斥反應(yīng)，科學(xué)家利用噬菌體展示庫技術(shù)生產(chǎn)出全人源化單抗（單抗成分全部由人的基因編碼）。具體操作如下，用PCR技術(shù)從生物體內(nèi)擴增出整套編碼人抗體的基因序列，克隆到噬菌體載體上，并以融合蛋白的形式表達到噬菌體表面，從而可以方便地對抗體進行篩選、擴增。但是利用這種方法制備的抗體結(jié)構(gòu)準確程度下降，原因是 抗體是在原核細胞內(nèi)表達，原核生物不能對真核生物的復(fù)雜蛋白進行準確加工抗體是在原核細胞內(nèi)表達，原核生物不能對真核生物的復(fù)雜蛋白進行準確加工。
【考點】單克隆抗體及其應(yīng)用．
【答案】機械；胰蛋白；95%空氣和5%的CO2；克隆化；抗原一抗體雜交；細胞培養(yǎng)液；抗原；大量制備；將異源單抗的輕、重鏈可變區(qū)基因插入含有人抗體恒定區(qū)的基因中，并構(gòu)建基因表達載體，利用顯微注射技術(shù)將表達載體導(dǎo)入哺乳動物細胞中，表達出嵌合抗體；抗體是在原核細胞內(nèi)表達，原核生物不能對真核生物的復(fù)雜蛋白進行準確加工
【解答】
【點評】
聲明：本試題解析著作權(quán)屬菁優(yōu)網(wǎng)所有，未經(jīng)書面同意，不得復(fù)制發(fā)布。
發(fā)布：2024/6/27 10:35:59組卷：25引用：4難度：0.7
相似題
-
1．CD47是一種跨膜糖蛋白，它可與巨噬細胞表面的信號調(diào)節(jié)蛋白結(jié)合，從而抑制巨噬細胞的吞噬作用。肺癌、結(jié)腸癌等多種腫瘤細胞表面的CD47含量比正常細胞高1.6～5倍，導(dǎo)致吞噬細胞對腫瘤細胞的清除效果減弱?？茖W(xué)家推測，抗CD47的單克隆抗體可以解除CD47對巨噬細胞的抑制作用，為此他們按照如圖流程進行了實驗。下列敘述正確的是（ ）
發(fā)布：2024/12/31 1:30:1組卷：7引用：3難度：0.6 -
2．雙特異性抗體是指一個抗體分子可以與兩個不同抗原或同一抗原的兩個不同抗原表位相結(jié)合，目前最常利用雜交瘤雜交法來制備。長春花是原產(chǎn)于非洲東海岸的野生花卉，其所含的長春堿具有良好的抗腫瘤作用。圖1是某雙特異性抗體作用圖。圖2是科研人員通過雜交—雜交瘤細胞技術(shù)（免疫的B淋巴細胞和雜交瘤細胞雜交技術(shù)）生產(chǎn)能同時識別癌胚抗原和長春堿的雙特異性單克隆抗體的部分過程。請分析回答下列問題：
（1）與植物體細胞雜交相比，圖2中過程②特有的誘導(dǎo)融合的方法是，過程②選用的骨髓瘤細胞（選填“能”或“不能”）在HAT培養(yǎng)基上生長。
（2）對③篩選出的雜交瘤細胞，還需進行和，才能篩選出足夠量的既能無限增殖又能產(chǎn)生特異性抗體的雜交瘤細胞。與傳統(tǒng)血清抗體相比，單克隆抗體最主要的優(yōu)點是（答出一點）。
（3）圖2中①步驟注射癌胚抗原的目的是。圖2方框內(nèi)需要經(jīng)過次篩選，才能獲取單克隆雜交—雜交瘤細胞。體外培養(yǎng)到一定時期的單克隆雜交—雜交瘤細胞會因為、有害代謝物的積累和培養(yǎng)液中營養(yǎng)物質(zhì)缺乏等因素而分裂受阻，需進行傳代培養(yǎng)。
（4）與直接使用長春堿相比，將長春堿與雙特異性單克隆抗體結(jié)合后給藥，對人體的副作用更小，原因是。發(fā)布：2024/12/31 1:30:1組卷：21引用：4難度：0.5 -
3．使用高效的細胞毒素藥物進行化療可以有效殺傷腫瘤細胞但細胞毒素沒有特異性，在殺傷腫瘤細胞的同時還會對健康細胞造成傷害。這限制了它在臨床上的應(yīng)用?？贵w一藥物偶聯(lián)物（ADC）通過將細胞毒素與能特異性識別腫瘤抗原的單克隆抗體結(jié)合，實現(xiàn)了對腫瘤細胞的選擇性殺傷ADC通常由抗體、接頭和藥物（如細胞毒素）三部分組成，它的作用機制如圖所示。下列敘述正確的是（ ?。?br />
發(fā)布：2024/12/31 3:30:1組卷：18引用：2難度：0.7
相關(guān)試卷