人腺病毒3型能引起人產(chǎn)生急性呼吸系統(tǒng)疾病（ARD），具有較高的發(fā)病率和一定的致死率。研究人員利用人腺病毒5型商品化的質(zhì)粒P5和基因工程等技術(shù)，構(gòu)建新型的復(fù)制缺陷型腺病毒3型疫苗，用于預(yù)防ARD。
（1）腺病毒衣殼的H蛋白能夠刺激機(jī)體產(chǎn)生特異性抗體。研究人員通過(guò)同源重組的方法利用質(zhì)粒p5和重組質(zhì)粒p3構(gòu)建重組腺病毒3型表達(dá)載體pr3，并獲得重組腺病毒3型株。過(guò)程如圖1。
①實(shí)驗(yàn)中利用 PCRPCR技術(shù)擴(kuò)增人腺病毒3型的H基因（H3），選用限制酶 EcoRV和XhoⅠEcoRV和XhoⅠ和DNA連接酶以確保H3基因能正確連接在p3質(zhì)粒的特定位置。
②p5質(zhì)粒上由于缺失E1基因，表現(xiàn)復(fù)制缺陷。P3質(zhì)粒與p5質(zhì)粒的左臂與右臂存在相同的硪基序列，易發(fā)生 交換交換，有利于得到同源重組的pr3質(zhì)粒，使之表現(xiàn)為與p5質(zhì)粒相同的復(fù)制缺陷。pr3質(zhì)粒經(jīng)PacI酶處理后，將得到的DNA片段轉(zhuǎn)染至A2細(xì)胞（能夠表達(dá)E1蛋白）中，獲得重組腺病毒3型株。轉(zhuǎn)染至A2細(xì)胞中的DNA片段存在與 有H3蛋白、人源熒光蛋白、H5蛋白（病毒的衣殼蛋白）有H3蛋白、人源熒光蛋白、H5蛋白（病毒的衣殼蛋白）蛋白合成有關(guān)的基因。
（2）為評(píng)估重組腺病毒3型株作為抗原的有效性，研究人員使用抗H3單克隆抗體檢測(cè)H3基因在A2細(xì)胞中的表達(dá)情況，結(jié)果如圖2。
實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：在重組腺病毒3型株的H3基因可在A2細(xì)胞表達(dá)，說(shuō)明重組腺病毒3型株作為抗原的是有效的在重組腺病毒3型株的H3基因可在A2細(xì)胞表達(dá)，說(shuō)明重組腺病毒3型株作為抗原的是有效的。
（3）為評(píng)估重組腺病毒3型株疫苗的安全性，分別用其感染A2細(xì)胞和A5細(xì)胞（與人體正常體細(xì)胞相同，不能表達(dá)E1蛋白），至少培養(yǎng)20代。在熒光顯微鏡下檢測(cè)重組腺病毒3型株的繁殖情況，預(yù)期結(jié)果為 A2細(xì)胞可檢測(cè)到大量的熒光，重組腺病毒3型進(jìn)行了繁殖；在A5細(xì)胞幾乎檢測(cè)不到熒光，重組腺病毒3型沒(méi)有繁殖A2細(xì)胞可檢測(cè)到大量的熒光，重組腺病毒3型進(jìn)行了繁殖；在A5細(xì)胞幾乎檢測(cè)不到熒光，重組腺病毒3型沒(méi)有繁殖，說(shuō)明疫苗安全。
【考點(diǎn)】基因工程的操作過(guò)程綜合．
【答案】PCR；EcoRV和XhoⅠ；交換；有H3蛋白、人源熒光蛋白、H5蛋白（病毒的衣殼蛋白）；在重組腺病毒3型株的H3基因可在A2細(xì)胞表達(dá)，說(shuō)明重組腺病毒3型株作為抗原的是有效的；A2細(xì)胞可檢測(cè)到大量的熒光，重組腺病毒3型進(jìn)行了繁殖；在A5細(xì)胞幾乎檢測(cè)不到熒光，重組腺病毒3型沒(méi)有繁殖
【解答】
【點(diǎn)評(píng)】
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發(fā)布：2024/6/27 10:35:59組卷：19引用：2難度：0.6
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1．下列有關(guān)基因工程技術(shù)和蛋白質(zhì)工程技術(shù)敘述正確的是（ ?。?/h2>
發(fā)布：2025/1/5 8:0:1組卷：6引用：1難度：0.7 -
2．下列有關(guān)基因工程的敘述，正確的是（ ?。?/h2>
發(fā)布：2024/12/31 5:0:5組卷：3引用：2難度：0.7 -
3．幾丁質(zhì)是許多真菌細(xì)胞壁的重要成分，幾丁質(zhì)酶可催化幾丁質(zhì)水解。通過(guò)基因工程將幾丁質(zhì)酶基因轉(zhuǎn)入植物體內(nèi)，可增強(qiáng)其抗真菌病的能力?；卮鹣铝袉?wèn)題：
（1）基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以從基因文庫(kù)中獲得?；蛭膸?kù)包括和。
（2）生物體細(xì)胞內(nèi)的DNA復(fù)制開(kāi)始時(shí)，解開(kāi)DNA雙鏈的酶是。在體外利用PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因時(shí)，使反應(yīng)體系中的模板DNA解鏈為單鏈的條件是。上述兩個(gè)解鏈過(guò)程的共同點(diǎn)是破壞了DNA雙鏈分子中的。
（3）DNA連接酶是將兩個(gè)DNA片段連接起來(lái)的酶，常見(jiàn)的有和，其中既能連接黏性末端又能連接平末端的是。當(dāng)幾丁質(zhì)酶基因和質(zhì)粒載體連接時(shí)，DNA連接酶催化形成的化學(xué)鍵是。
（4）提取RNA時(shí)，提取液中需添加RNA酶抑制劑，其目的是。
（5）若獲得的轉(zhuǎn)基因植株（幾丁質(zhì)酶基因已經(jīng)整合到植物的基因組中）抗真菌病的能力沒(méi)有提高，根據(jù)中心法則分析，其可能的原因是。發(fā)布：2025/1/5 8:0:1組卷：2引用：2難度：0.6
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