透明顫菌血紅蛋白基因vgb表達(dá)產(chǎn)物VHb蛋白能使其在低氧的環(huán)境中生長良好。頂頭孢霉是好氧性真菌，其發(fā)酵產(chǎn)物頭孢菌素C有很大的市場需求量，但低氧環(huán)境影響其產(chǎn)量，傳統(tǒng)發(fā)酵生產(chǎn)的增氧成本高。為提高產(chǎn)量科研人員將透明顫菌血紅蛋白基因vgb基因和頂頭孢霉pcpC啟動(dòng)子進(jìn)行PCR拼接，并與質(zhì)粒1構(gòu)建重組質(zhì)粒，如圖。
注：hph是潮霉素抗性基因，Vgb基因與hph基因共用終止子。
回答下列問題：
（1）PCR過程需要設(shè)計(jì)引物，引物的作用是 使DNA聚合酶能夠從引物的3’端開始連接脫氧核苷酸使DNA聚合酶能夠從引物的3’端開始連接脫氧核苷酸。
（2）據(jù)圖所示，重疊延伸PCR拼接時(shí)，若啟動(dòng)子啟動(dòng)方向與引物3延伸方向一致，引物2和引物3的5′端需分別添加 XbaⅠ、BamⅠXbaⅠ、BamⅠ序列。拼接形成重組基因的目的是 使頂頭孢霉在低氧的環(huán)境中生長良好，提高其發(fā)酵產(chǎn)物頭孢菌素C的產(chǎn)量使頂頭孢霉在低氧的環(huán)境中生長良好，提高其發(fā)酵產(chǎn)物頭孢菌素C的產(chǎn)量。
（3）利用含有 潮霉素潮霉素的選擇培養(yǎng)基篩選菌種，最后從個(gè)體生物學(xué)水平上鑒定，若 在低氧環(huán)境下，檢測到頭孢菌素C表達(dá)量增多在低氧環(huán)境下，檢測到頭孢菌素C表達(dá)量增多，則表示轉(zhuǎn)化成功。
（4）為驗(yàn)證轉(zhuǎn)化成功的重組菌株遺傳穩(wěn)定性，可將菌株在 不含不含（ 含/不含）潮霉素的液體培養(yǎng)基中連續(xù)轉(zhuǎn)接10代，取第10代菌液采用 稀釋涂布平板法稀釋涂布平板法法接種到 含含（ 含/不含）潮霉素的固體培養(yǎng)基上，若能在固體培養(yǎng)基上生長，表明重組菌株遺傳穩(wěn)定性良好。
【考點(diǎn)】基因工程的操作過程綜合；DNA片段的擴(kuò)增與電泳鑒定．
【答案】使DNA聚合酶能夠從引物的3’端開始連接脫氧核苷酸；XbaⅠ、BamⅠ；使頂頭孢霉在低氧的環(huán)境中生長良好，提高其發(fā)酵產(chǎn)物頭孢菌素C的產(chǎn)量；潮霉素；在低氧環(huán)境下，檢測到頭孢菌素C表達(dá)量增多；不含；稀釋涂布平板法；含
【解答】
【點(diǎn)評】
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發(fā)布：2024/5/12 8:0:9組卷：31引用：2難度：0.6
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1．下列有關(guān)基因工程技術(shù)和蛋白質(zhì)工程技術(shù)敘述正確的是（ ?。?/h2>
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3．幾丁質(zhì)是許多真菌細(xì)胞壁的重要成分，幾丁質(zhì)酶可催化幾丁質(zhì)水解。通過基因工程將幾丁質(zhì)酶基因轉(zhuǎn)入植物體內(nèi)，可增強(qiáng)其抗真菌病的能力?；卮鹣铝袉栴}：
（1）基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以從基因文庫中獲得?；蛭膸彀?和。
（2）生物體細(xì)胞內(nèi)的DNA復(fù)制開始時(shí)，解開DNA雙鏈的酶是。在體外利用PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因時(shí)，使反應(yīng)體系中的模板DNA解鏈為單鏈的條件是。上述兩個(gè)解鏈過程的共同點(diǎn)是破壞了DNA雙鏈分子中的。
（3）DNA連接酶是將兩個(gè)DNA片段連接起來的酶，常見的有和，其中既能連接黏性末端又能連接平末端的是。當(dāng)幾丁質(zhì)酶基因和質(zhì)粒載體連接時(shí)，DNA連接酶催化形成的化學(xué)鍵是。
（4）提取RNA時(shí)，提取液中需添加RNA酶抑制劑，其目的是。
（5）若獲得的轉(zhuǎn)基因植株（幾丁質(zhì)酶基因已經(jīng)整合到植物的基因組中）抗真菌病的能力沒有提高，根據(jù)中心法則分析，其可能的原因是。發(fā)布：2025/1/5 8:0:1組卷：2引用：2難度：0.6
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