凝乳酶是食品生產(chǎn)中常用的凝結(jié)劑，科研人員從動(dòng)物體內(nèi)獲得了凝乳酶mRNA，擬利用大腸桿菌通過(guò)基因工程生產(chǎn)凝乳酶。據(jù)此回答下列問(wèn)題：
（1）利用凝乳酶mRNA，在 逆轉(zhuǎn)錄逆轉(zhuǎn)錄酶的作用下，可以得到凝乳酶的cDNA，進(jìn)一步通過(guò)PCR擴(kuò)增時(shí)需要2種引物，引物的作用是 與模板單鏈結(jié)合延伸子鏈（使DNA聚合酶從引物的3’端開始 連接脫氧核苷酸）與模板單鏈結(jié)合延伸子鏈（使DNA聚合酶從引物的3’端開始 連接脫氧核苷酸）。
（2）圖1和圖2是選用的質(zhì)粒及其幾種相關(guān)限制酶的識(shí)別位點(diǎn)，在構(gòu)建基因表達(dá)載體時(shí)，最好選用的限制酶是 EcoRⅠ、BglⅡ或EcoRⅠ、BamHⅠEcoRⅠ、BglⅡ或EcoRⅠ、BamHⅠ，這樣選擇的優(yōu)點(diǎn)是 避免標(biāo)記基因被破壞、質(zhì)粒自身環(huán)化和目的基因的反向連接（確保目的基因與質(zhì)粒正向連接）避免標(biāo)記基因被破壞、質(zhì)粒自身環(huán)化和目的基因的反向連接（確保目的基因與質(zhì)粒正向連接）（答出兩點(diǎn)）。為在凝乳酶基因兩側(cè)加上相應(yīng)的酶切位點(diǎn)，設(shè)計(jì)引物時(shí)需在引物前添加相應(yīng)酶切位點(diǎn)，PCR過(guò)程中至少?gòu)?fù)制 33次可以得到含所需酶切位點(diǎn)的凝乳酶基因。
（3）將構(gòu)建的重組質(zhì)粒導(dǎo)入大腸桿菌，需要用鈣離子處理，使大腸桿菌處于 感受態(tài)（容易吸收外源DNA分子的狀態(tài)）感受態(tài)（容易吸收外源DNA分子的狀態(tài)）。
（4）將在添加了青霉素的培養(yǎng)基中得到的4個(gè)大腸桿菌菌落，進(jìn)行進(jìn)一步檢測(cè)，檢測(cè)結(jié)果如圖3所示，1～4號(hào)菌落需要舍棄的是1號(hào)和 2號(hào)、3號(hào)2號(hào)、3號(hào)。其中舍棄1號(hào)菌落的理由是 目的基因未導(dǎo)入目的基因未導(dǎo)入。
【考點(diǎn)】基因工程的操作過(guò)程綜合．
【答案】逆轉(zhuǎn)錄；與模板單鏈結(jié)合延伸子鏈（使DNA聚合酶從引物的3’端開始 連接脫氧核苷酸）；EcoRⅠ、BglⅡ或EcoRⅠ、BamHⅠ；避免標(biāo)記基因被破壞、質(zhì)粒自身環(huán)化和目的基因的反向連接（確保目的基因與質(zhì)粒正向連接）；3；感受態(tài)（容易吸收外源DNA分子的狀態(tài)）；2號(hào)、3號(hào)；目的基因未導(dǎo)入
【解答】
【點(diǎn)評(píng)】
聲明：本試題解析著作權(quán)屬菁優(yōu)網(wǎng)所有，未經(jīng)書面同意，不得復(fù)制發(fā)布。
發(fā)布：2024/6/27 10:35:59組卷：33引用：2難度：0.9
相似題
-
1．下列有關(guān)基因工程技術(shù)和蛋白質(zhì)工程技術(shù)敘述正確的是（ ?。?/h2>
發(fā)布：2025/1/5 8:0:1組卷：6引用：1難度：0.7 -
2．下列有關(guān)基因工程的敘述，正確的是（ ）
發(fā)布：2024/12/31 5:0:5組卷：3引用：2難度：0.7 -
3．幾丁質(zhì)是許多真菌細(xì)胞壁的重要成分，幾丁質(zhì)酶可催化幾丁質(zhì)水解。通過(guò)基因工程將幾丁質(zhì)酶基因轉(zhuǎn)入植物體內(nèi)，可增強(qiáng)其抗真菌病的能力。回答下列問(wèn)題：
（1）基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以從基因文庫(kù)中獲得?；蛭膸?kù)包括和。
（2）生物體細(xì)胞內(nèi)的DNA復(fù)制開始時(shí)，解開DNA雙鏈的酶是。在體外利用PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因時(shí)，使反應(yīng)體系中的模板DNA解鏈為單鏈的條件是。上述兩個(gè)解鏈過(guò)程的共同點(diǎn)是破壞了DNA雙鏈分子中的。
（3）DNA連接酶是將兩個(gè)DNA片段連接起來(lái)的酶，常見的有和，其中既能連接黏性末端又能連接平末端的是。當(dāng)幾丁質(zhì)酶基因和質(zhì)粒載體連接時(shí)，DNA連接酶催化形成的化學(xué)鍵是。
（4）提取RNA時(shí)，提取液中需添加RNA酶抑制劑，其目的是。
（5）若獲得的轉(zhuǎn)基因植株（幾丁質(zhì)酶基因已經(jīng)整合到植物的基因組中）抗真菌病的能力沒有提高，根據(jù)中心法則分析，其可能的原因是。發(fā)布：2025/1/5 8:0:1組卷：2引用：2難度：0.6
把好題分享給你的好友吧~~