定點(diǎn)突變技術(shù)是指通過(guò)PCR等方法改變DNA片段特定位點(diǎn)的堿基，從而獲得突變基因的操作技術(shù)。研究者將釀酒酵母S288c的APAⅠ基因與EGFP（增強(qiáng)型綠色熒光蛋白）基因構(gòu)成融合基因，并進(jìn)一步構(gòu)建表達(dá)載體，以該載體為模板，再通過(guò)PCR介導(dǎo)的定點(diǎn)突變技術(shù)向APAⅠ基因中分別引入APAⅠ-1/2/3/4四個(gè)突變位點(diǎn)，分別轉(zhuǎn)化釀酒酵母YS59。回答下列問(wèn)題：
（1）構(gòu)建APAⅠ基因與EGFP基因的融合基因時(shí).需借助的工具酶是 限制酶、DNA連接酶限制酶、DNA連接酶，使APAⅠ基因與EGFP基因首尾相連，處在同一 啟動(dòng)子啟動(dòng)子、終止子終止子等調(diào)控序列的控制之下；EGFP基因的作用是 作為標(biāo)記基因作為標(biāo)記基因。
（2）上述PCR介導(dǎo)的定點(diǎn)誘變過(guò)程中，除以載體為模板外，還需要加入四種 脫氧核苷酸脫氧核苷酸，兩種根據(jù) APA1基因APA1基因的序列設(shè)計(jì)合成且含有突變位點(diǎn)的互補(bǔ)的引物。
（3）若在熒光顯微鏡下觀察到受體細(xì)胞有綠色熒光，表明 APA1基因與EGFP基因已經(jīng)表達(dá)（形成蛋白質(zhì)產(chǎn)物）APA1基因與EGFP基因已經(jīng)表達(dá)（形成蛋白質(zhì)產(chǎn)物）。
（4）若將定點(diǎn)突變的基因?qū)胫参锛?xì)胞，在一定 營(yíng)養(yǎng)和激素營(yíng)養(yǎng)和激素（答出2點(diǎn)）等條件下，轉(zhuǎn)基因細(xì)胞經(jīng)過(guò)脫分化形成 愈傷組織愈傷組織，進(jìn)一步誘導(dǎo)其 再分化再分化可以發(fā)育成轉(zhuǎn)基因植株。
【考點(diǎn)】基因工程的操作過(guò)程綜合．
【答案】限制酶、DNA連接酶；啟動(dòng)子；終止子；作為標(biāo)記基因；脫氧核苷酸；APA1基因；APA1基因與EGFP基因已經(jīng)表達(dá)（形成蛋白質(zhì)產(chǎn)物）；營(yíng)養(yǎng)和激素；愈傷組織；再分化
【解答】
【點(diǎn)評(píng)】
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發(fā)布：2024/4/20 14:35:0組卷：12引用：3難度：0.7
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1．下列有關(guān)基因工程技術(shù)和蛋白質(zhì)工程技術(shù)敘述正確的是（ ）
發(fā)布：2025/1/5 8:0:1組卷：6引用：1難度：0.7 -
2．下列有關(guān)基因工程的敘述，正確的是（ ?。?/h2>
發(fā)布：2024/12/31 5:0:5組卷：3引用：2難度：0.7 -
3．幾丁質(zhì)是許多真菌細(xì)胞壁的重要成分，幾丁質(zhì)酶可催化幾丁質(zhì)水解。通過(guò)基因工程將幾丁質(zhì)酶基因轉(zhuǎn)入植物體內(nèi)，可增強(qiáng)其抗真菌病的能力。回答下列問(wèn)題：
（1）基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以從基因文庫(kù)中獲得?；蛭膸?kù)包括和。
（2）生物體細(xì)胞內(nèi)的DNA復(fù)制開(kāi)始時(shí)，解開(kāi)DNA雙鏈的酶是。在體外利用PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因時(shí)，使反應(yīng)體系中的模板DNA解鏈為單鏈的條件是。上述兩個(gè)解鏈過(guò)程的共同點(diǎn)是破壞了DNA雙鏈分子中的。
（3）DNA連接酶是將兩個(gè)DNA片段連接起來(lái)的酶，常見(jiàn)的有和，其中既能連接黏性末端又能連接平末端的是。當(dāng)幾丁質(zhì)酶基因和質(zhì)粒載體連接時(shí)，DNA連接酶催化形成的化學(xué)鍵是。
（4）提取RNA時(shí)，提取液中需添加RNA酶抑制劑，其目的是。
（5）若獲得的轉(zhuǎn)基因植株（幾丁質(zhì)酶基因已經(jīng)整合到植物的基因組中）抗真菌病的能力沒(méi)有提高，根據(jù)中心法則分析，其可能的原因是。發(fā)布：2025/1/5 8:0:1組卷：2引用：2難度：0.6
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