血凝素基因（HA）編碼的血凝素是構(gòu)成流感病毒包膜纖突的主要成分。成熟的血凝素包含HA1和HA2兩個(gè)亞單位，其中HA1含有病毒與受體相互作用的位點(diǎn)。人IgG抗體中的一段小肽，常作為融合蛋白標(biāo)簽，由IgGFc基因的片段（長(zhǎng)度為717bp）編碼。蛋白質(zhì)分泌依賴于信號(hào)肽的引導(dǎo)，本研究中用信號(hào)肽IL-2SS代替HA自身信號(hào)肽，科研人員嘗試構(gòu)建IL-2SS/HA1/IgGFc融合蛋白表達(dá)載體，并導(dǎo)入大腸桿菌表達(dá)和分泌。請(qǐng)回答下列問(wèn)題：

（1）流感病毒包膜主要由

蛋白質(zhì)和磷脂

蛋白質(zhì)和磷脂

組成，包膜上血凝素的合成場(chǎng)所在

宿主細(xì)胞的核糖體

宿主細(xì)胞的核糖體

。
（2）本實(shí)驗(yàn)用信號(hào)肽IL-2SS代替HA自身信號(hào)肽有利于融合蛋白分泌到大腸桿菌細(xì)胞外，PCR擴(kuò)增目的基因時(shí)應(yīng)該選擇圖中引物

bc

bc

。設(shè)計(jì)引物時(shí)，不能包含基因HA1的終止密碼子的編碼序列，原因是

防止產(chǎn)生的HA1上不含IgGFc標(biāo)簽（或防止IgGFc基因不表達(dá)）

防止產(chǎn)生的HA1上不含IgGFc標(biāo)簽（或防止IgGFc基因不表達(dá)）

。
（3）應(yīng)選擇限制酶

EcoRV

EcoRV

來(lái)切割質(zhì)粒A，然后直接將PCR產(chǎn)物與質(zhì)粒A混合，同時(shí)加入

T₄

T₄

DNA連接酶，使得目的基因與質(zhì)粒A相連。若目的基因與質(zhì)粒A正向連接，用BamH和SacI同時(shí)切割重組質(zhì)粒，完全酶切后的產(chǎn)物中短片段的長(zhǎng)度約為

1061

1061

bp。
（4）有時(shí)為了滿足應(yīng)用需要，會(huì)在載體中人工構(gòu)建誘導(dǎo)型啟動(dòng)子，當(dāng)誘導(dǎo)物存在時(shí)，可以

激活或者抑制目的基因的表達(dá)

激活或者抑制目的基因的表達(dá)

。
（5）圖示中的限制酶有的來(lái)自于大腸桿菌，但限制酶不能切割大腸桿菌本身的DNA分子，原因是

本身不具備該酶的識(shí)別序列（或識(shí)別序列已經(jīng)發(fā)生了甲基化）

本身不具備該酶的識(shí)別序列（或識(shí)別序列已經(jīng)發(fā)生了甲基化）

。