丙肝病毒（HCV）是一種RNA病毒，人們將得到的HCV的多個抗原基因首尾相連，連接在同一調(diào)控元件下，可構(gòu)成融合基因。對HCV感染的診斷步驟是：首先進(jìn)行抗HCV抗體檢測，若檢測結(jié)果呈陽性則還需要進(jìn)行HCV核酸檢測。HCV融合抗原可用于制作第三代HCV抗體檢測試劑。請回答下列問題：
  （1）首先需要獲得融合基因。即通過相關(guān)的RNA合成cDNA然后拼接起來，這個過程主要需要

逆轉(zhuǎn)錄

逆轉(zhuǎn)錄

酶和DNA連接酶等。其次要利用PCR技術(shù)擴(kuò)增融合基因。即先根據(jù)融合基因的核苷酸序列，設(shè)計并合成引物，若該融合基因的序列如圖2（虛線處省略了部分核苷酸序列），則PCR設(shè)計應(yīng)選用的兩種引物（部分）序列應(yīng)分別為：①5′-AACTAT-3′，②

5′-AGAGGC-3′（或 3′-CGGAGA-5′）

5′-AGAGGC-3′（或 3′-CGGAGA-5′）

。引物能與變性的融合基因單鏈結(jié)合，在

Taq 酶

Taq 酶

催化作用下延伸，如此循環(huán)多次。
（2）構(gòu)建融合基因表達(dá)載體。如圖1所示，表達(dá)載體上除了標(biāo)注的DNA片段外，在融合基因上游還必須擁有的DNA片段（箭頭所示）是

啟動子

啟動子

，其作用是

為RNA聚合酶的識別和結(jié)合的位點(diǎn)，驅(qū)動融合基因轉(zhuǎn)錄出mRNA

為RNA聚合酶的識別和結(jié)合的位點(diǎn)，驅(qū)動融合基因轉(zhuǎn)錄出mRNA

。
（3）用融合基因表達(dá)載體轉(zhuǎn)化大腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞。用含硫酸卡那霉素的培養(yǎng)基篩選出能生長的菌落，從而得到能產(chǎn)生HCV融合抗原的工程菌，原非感受態(tài)受體大腸桿菌細(xì)胞內(nèi)應(yīng)

不含有

不含有

（填“含有”或“不含有”）硫酸卡那霉素抗性基因。
（4）某人體內(nèi)HCV抗體檢測結(jié)果呈陽性，但進(jìn)行HCV核酸檢測時結(jié)果呈陰性，最可能的原因是

其感染HCV后通過免疫反應(yīng)已將HCV清除，但體內(nèi)存在抗HCV抗體

其感染HCV后通過免疫反應(yīng)已將HCV清除，但體內(nèi)存在抗HCV抗體

。