馬鈴薯休眠是指在最適宜的發(fā)芽環(huán)境下塊莖也不發(fā)芽的狀態(tài)。發(fā)芽會使馬鈴薯中的淀粉、蛋白質(zhì)和水分流失從而影響馬鈴薯塊莖的品質(zhì)。研究表明脫落酸會抑制塊莖的發(fā)芽,維持其休眠狀態(tài),環(huán)氧類胡蘿卜素雙氧合酶(NCED)是脫落酸生物合成中的限速酶。某實驗室以馬鈴薯栽培品種“隴薯3號”作為材料,從其體內(nèi)分離出NCED基因,構(gòu)建了啟動子CIPP啟動的NCED表達載體,最終獲得休眠期延長的轉(zhuǎn)基因馬鈴薯,其實驗流程如圖所示。請回答下列問題:
(1)以塊莖RNA為起點獲取并擴增NCED基因的技術(shù)稱為RT-PCR技術(shù),該過程中需要加入的酶是 逆轉(zhuǎn)錄酶、熱穩(wěn)定的DNA聚合酶(Tag酶)逆轉(zhuǎn)錄酶、熱穩(wěn)定的DNA聚合酶(Tag酶),需要加入的原料是 4種脫氧核苷酸(dNTP)4種脫氧核苷酸(dNTP)。
(2)基因工程的核心是 基因表達載體的構(gòu)建基因表達載體的構(gòu)建,其目的是 使目的基因在受體細胞中穩(wěn)定存在并遺傳給下一代,同時使目的基因能表達和發(fā)揮作用使目的基因在受體細胞中穩(wěn)定存在并遺傳給下一代,同時使目的基因能表達和發(fā)揮作用。
(3)啟動子CIPP的作用是 RNA聚合酶結(jié)合和識別的位點,啟動基因轉(zhuǎn)錄RNA聚合酶結(jié)合和識別的位點,啟動基因轉(zhuǎn)錄。
(4)將基因表達載體轉(zhuǎn)入“隴薯3號”愈傷組織細胞常用的方法是 農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法。
(5)為檢測目的基因是否插入受體細胞的染色體DNA上,可采用 DNA分子雜交DNA分子雜交技術(shù),以 同位素標記的目的基因同位素標記的目的基因為探針進行雜交。
【考點】基因工程的操作過程綜合.
【答案】逆轉(zhuǎn)錄酶、熱穩(wěn)定的DNA聚合酶(Tag酶);4種脫氧核苷酸(dNTP);基因表達載體的構(gòu)建;使目的基因在受體細胞中穩(wěn)定存在并遺傳給下一代,同時使目的基因能表達和發(fā)揮作用;RNA聚合酶結(jié)合和識別的位點,啟動基因轉(zhuǎn)錄;農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法;DNA分子雜交;同位素標記的目的基因
【解答】
【點評】
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