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科學家將tetX基因(四環(huán)素降解酶基因)和pET28a質粒結合,導入大腸桿菌,通過發(fā)酵可生產(chǎn)四環(huán)素降解酶。某DNA分子上tetX基因片段附近和pET28a質粒上的限制酶酶切位點如圖1所示,其中BamHⅠ的識別序列為5'G↓GATCC3',NdeⅠ的識別序列是5'CA↓TATG3'。圖2表示利用PCR技術從某DNA中獲取tetX基因的一個環(huán)節(jié)?;卮鹣铝袉栴}:

(1)基因轉錄時,3'端在啟動子端的單鏈充當模板,為保證tetX基因能用β鏈充當轉錄模板,設計引物時最好在圖2所示引物Ⅰ的5端方框位置添加3'
GTATAC
GTATAC
5'序列,經(jīng)PCR擴增后,獲得足量目的基因片段,再用
BamHⅠ和NdeⅠ
BamHⅠ和NdeⅠ
酶切割質粒和tetX基因兩端,從而構建重組質粒。
(2)某同學用PCR儀擴增tetX基因時,加入(2n-1)對引物,引物Ⅰ(3'CGCGAA?AATGC5')和引物Ⅱ(5'CACTC?GCGCTT3')各半,其他條件符合要求,發(fā)現(xiàn)最終產(chǎn)物中tetX基因數(shù)量遠少于2n個,試從所用引物Ⅰ和引物Ⅱ序列的角度,分析原因
復性時,部分引物Ⅰ和引物Ⅱ的3'端序列可以相互配對形成雙鏈,升高溫度后它們未配對的部分可互為模板進行延伸
復性時,部分引物Ⅰ和引物Ⅱ的3'端序列可以相互配對形成雙鏈,升高溫度后它們未配對的部分可互為模板進行延伸
,這種情況的存在,也是PCR產(chǎn)物需要利用
(瓊脂糖)凝膠電泳
(瓊脂糖)凝膠電泳
進行鑒定的原因之一。
(3)tetX基因隨上述重組質粒進入大腸桿菌中穩(wěn)定存在并表達的過程稱為
轉化
轉化
。充當受體菌的大腸桿菌應
不抗
不抗
(“抗”或“不抗”)卡那霉素,在含卡那霉素的培養(yǎng)基上能形成菌落的受體菌中未必含tetX基因,原因是
只轉入未攜帶tetX基因的pET28a質粒的大腸桿菌也可以在含卡那霉素的培養(yǎng)基中存活
只轉入未攜帶tetX基因的pET28a質粒的大腸桿菌也可以在含卡那霉素的培養(yǎng)基中存活
。

【答案】GTATAC;BamHⅠ和NdeⅠ;復性時,部分引物Ⅰ和引物Ⅱ的3'端序列可以相互配對形成雙鏈,升高溫度后它們未配對的部分可互為模板進行延伸;(瓊脂糖)凝膠電泳;轉化;不抗;只轉入未攜帶tetX基因的pET28a質粒的大腸桿菌也可以在含卡那霉素的培養(yǎng)基中存活
【解答】
【點評】
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發(fā)布:2024/5/11 8:0:9組卷:14引用:2難度:0.4
相似題
  • 1.下列有關基因工程技術和蛋白質工程技術敘述正確的是( ?。?/h2>

    發(fā)布:2025/1/5 8:0:1組卷:6引用:1難度:0.7
  • 2.幾丁質是許多真菌細胞壁的重要成分,幾丁質酶可催化幾丁質水解。通過基因工程將幾丁質酶基因轉入植物體內,可增強其抗真菌病的能力。回答下列問題:
    (1)基因工程中所用的目的基因可以人工合成,也可以從基因文庫中獲得?;蛭膸彀?
     
     

    (2)生物體細胞內的DNA復制開始時,解開DNA雙鏈的酶是
     
    。在體外利用PCR技術擴增目的基因時,使反應體系中的模板DNA解鏈為單鏈的條件是
     
    。上述兩個解鏈過程的共同點是破壞了DNA雙鏈分子中的
     
    。
    (3)DNA連接酶是將兩個DNA片段連接起來的酶,常見的有
     
     
    ,其中既能連接黏性末端又能連接平末端的是
     
    。當幾丁質酶基因和質粒載體連接時,DNA連接酶催化形成的化學鍵是
     

    (4)提取RNA時,提取液中需添加RNA酶抑制劑,其目的是
     
    。
    (5)若獲得的轉基因植株(幾丁質酶基因已經(jīng)整合到植物的基因組中)抗真菌病的能力沒有提高,根據(jù)中心法則分析,其可能的原因是
     

    發(fā)布:2025/1/5 8:0:1組卷:2引用:2難度:0.6
  • 3.下列有關基因工程的敘述,正確的是( ?。?/h2>

    發(fā)布:2024/12/31 5:0:5組卷:3引用:2難度:0.7
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