對(duì)疑似PRRS（豬繁殖與呼吸綜合征）的病料（從得病的動(dòng)物身上采集的組織或器官）進(jìn)行病毒分離鑒定，獲得一株高致病性PRRSV（豬繁殖與呼吸綜合征病毒），通過(guò)對(duì)高致病性PRRSV的N蛋白進(jìn)行研究來(lái)探討該蛋白的抗原特性，并制備抗N蛋白的單克隆抗體。回答下列問(wèn)題：
（1）PRRSV N蛋白基因的克?。禾崛RRSV中的總RNA，以其中相應(yīng)的RNA作為模板，利用逆轉(zhuǎn)錄逆轉(zhuǎn)錄酶逆轉(zhuǎn)錄成cDNA．再以cDNA為模板進(jìn)行PCRPCR擴(kuò)增，而獲得N蛋白基因。
（2）表達(dá)N蛋白細(xì)胞的制備：用重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化轉(zhuǎn)化合適的大腸桿菌細(xì)胞，為提高該過(guò)程的效率，需考慮重組質(zhì)粒的質(zhì)量和濃度質(zhì)量和濃度等。將篩選過(guò)的受體細(xì)胞37℃培養(yǎng)液培養(yǎng)。
（3）單克隆抗體的制備與檢測(cè)：取免疫小鼠的脾細(xì)胞與小鼠骨髓瘤細(xì)胞融合待融合細(xì)胞生長(zhǎng)到培養(yǎng)孔底面積的110時(shí)進(jìn)行抗體抗體（填物質(zhì)）篩選。檢出的陽(yáng)性孔用有限稀釋法進(jìn)行多次克隆化，建立單克隆抗體細(xì)胞株細(xì)胞株。最終獲得的單克隆抗體是否達(dá)到實(shí)驗(yàn)要求的標(biāo)志是N蛋白可與抗N蛋白的單抗發(fā)生特異性的結(jié)合N蛋白可與抗N蛋白的單抗發(fā)生特異性的結(jié)合，與無(wú)關(guān)蛋白不發(fā)生反應(yīng)。
（4）豬干細(xì)胞的應(yīng)用：胚胎干細(xì)胞可以進(jìn)行基因敲除基因敲除，獲得適合猴子移植的豬器官，減弱或消除排斥反應(yīng)。
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【考點(diǎn)】單克隆抗體及其應(yīng)用．
【答案】逆轉(zhuǎn)錄；PCR；轉(zhuǎn)化；質(zhì)量和濃度；抗體；細(xì)胞株；N蛋白可與抗N蛋白的單抗發(fā)生特異性的結(jié)合；基因敲除
【解答】
【點(diǎn)評(píng)】
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發(fā)布：2024/4/20 14:35:0組卷：20引用：2難度：0.7
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1．CD47是一種跨膜糖蛋白，它可與巨噬細(xì)胞表面的信號(hào)調(diào)節(jié)蛋白結(jié)合，從而抑制巨噬細(xì)胞的吞噬作用。肺癌、結(jié)腸癌等多種腫瘤細(xì)胞表面的CD47含量比正常細(xì)胞高1.6～5倍，導(dǎo)致吞噬細(xì)胞對(duì)腫瘤細(xì)胞的清除效果減弱。科學(xué)家推測(cè)，抗CD47的單克隆抗體可以解除CD47對(duì)巨噬細(xì)胞的抑制作用，為此他們按照如圖流程進(jìn)行了實(shí)驗(yàn)。下列敘述正確的是（ ）
發(fā)布：2024/12/31 1:30:1組卷：7引用：3難度：0.6 -
2．雙特異性抗體是指一個(gè)抗體分子可以與兩個(gè)不同抗原或同一抗原的兩個(gè)不同抗原表位相結(jié)合，目前最常利用雜交瘤雜交法來(lái)制備。長(zhǎng)春花是原產(chǎn)于非洲東海岸的野生花卉，其所含的長(zhǎng)春堿具有良好的抗腫瘤作用。圖1是某雙特異性抗體作用圖。圖2是科研人員通過(guò)雜交—雜交瘤細(xì)胞技術(shù)（免疫的B淋巴細(xì)胞和雜交瘤細(xì)胞雜交技術(shù)）生產(chǎn)能同時(shí)識(shí)別癌胚抗原和長(zhǎng)春堿的雙特異性單克隆抗體的部分過(guò)程。請(qǐng)分析回答下列問(wèn)題：
（1）與植物體細(xì)胞雜交相比，圖2中過(guò)程②特有的誘導(dǎo)融合的方法是，過(guò)程②選用的骨髓瘤細(xì)胞（選填“能”或“不能”）在HAT培養(yǎng)基上生長(zhǎng)。
（2）對(duì)③篩選出的雜交瘤細(xì)胞，還需進(jìn)行和，才能篩選出足夠量的既能無(wú)限增殖又能產(chǎn)生特異性抗體的雜交瘤細(xì)胞。與傳統(tǒng)血清抗體相比，單克隆抗體最主要的優(yōu)點(diǎn)是（答出一點(diǎn)）。
（3）圖2中①步驟注射癌胚抗原的目的是。圖2方框內(nèi)需要經(jīng)過(guò)次篩選，才能獲取單克隆雜交—雜交瘤細(xì)胞。體外培養(yǎng)到一定時(shí)期的單克隆雜交—雜交瘤細(xì)胞會(huì)因?yàn)?、有害代謝物的積累和培養(yǎng)液中營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)缺乏等因素而分裂受阻，需進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
（4）與直接使用長(zhǎng)春堿相比，將長(zhǎng)春堿與雙特異性單克隆抗體結(jié)合后給藥，對(duì)人體的副作用更小，原因是。發(fā)布：2024/12/31 1:30:1組卷：21引用：4難度：0.5 -
3．使用高效的細(xì)胞毒素藥物進(jìn)行化療可以有效殺傷腫瘤細(xì)胞但細(xì)胞毒素沒(méi)有特異性，在殺傷腫瘤細(xì)胞的同時(shí)還會(huì)對(duì)健康細(xì)胞造成傷害。這限制了它在臨床上的應(yīng)用?？贵w一藥物偶聯(lián)物（ADC）通過(guò)將細(xì)胞毒素與能特異性識(shí)別腫瘤抗原的單克隆抗體結(jié)合，實(shí)現(xiàn)了對(duì)腫瘤細(xì)胞的選擇性殺傷ADC通常由抗體、接頭和藥物（如細(xì)胞毒素）三部分組成，它的作用機(jī)制如圖所示。下列敘述正確的是（ ）
發(fā)布：2024/12/31 3:30:1組卷：18引用：2難度：0.7
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