為了提高馬鈴薯對真菌病害的抗性，某科研小組進行了馬鈴薯轉(zhuǎn)基因抗病育種的初步研究，其過程如下所示，請將其完善：
（1）從生防木霉菌株中提取總RNA以及通過 逆轉(zhuǎn)錄逆轉(zhuǎn)錄過程合成cDNA。
（2）利用PCR技術(shù)對目的基因Chi（抗菌基因）進行擴增；PCR產(chǎn)物與PMDTM18-T載體連接，轉(zhuǎn)化到大腸桿菌，獲得重組質(zhì)粒PMDTM18-T-Chi。
（2）植物表達載體的構(gòu)建（如圖所示）：將重組質(zhì)粒PMDTM18-T-Chi和p33ECR質(zhì)粒用 BamHI和SacIBamHI和SacI（填具體酶）進行酶切，再用T4DNA連接酶連接，得到p33ECR-Chi。此過程中一般會使用高濃度的T4DNA連接酶，T4DNA連接酶的作用是 既可以“縫合”雙鏈DNA片段互補的黏性末端，又可以“縫合“雙鏈DNA片段的平末端既可以“縫合”雙鏈DNA片段互補的黏性末端，又可以“縫合“雙鏈DNA片段的平末端。表達載體中p35S是 RNA聚合酶RNA聚合酶識別和結(jié)合的部位。
（3）p33ECR-Chi工程菌的獲得：將p33ECR-Chi質(zhì)粒轉(zhuǎn)化至農(nóng)桿菌菌株中，在含 氨芐青霉素氨芐青霉素的培養(yǎng)基上獲得白色菌斑，挑菌落，獲得工程菌。
（4）轉(zhuǎn)基因植株的獲得：通過農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法將Chi基因轉(zhuǎn)化到馬鈴薯栽培品種試管馬鈴薯的塊莖中。試管馬鈴薯的塊莖是馬鈴薯遺傳轉(zhuǎn)化的理想外植體，分析其具有的優(yōu)點是 取材方便、無需滅菌、周期短、轉(zhuǎn)化效率高和不定芽能直接再生取材方便、無需滅菌、周期短、轉(zhuǎn)化效率高和不定芽能直接再生（寫出兩點）。
（5）對馬鈴薯進行抗菌檢測：從分子水平上可采用 抗原—抗體雜交抗原—抗體雜交法檢測目的基因表達的產(chǎn)物；從個體水平上進行檢測的操作是 霉菌接種實驗霉菌接種實驗。
【考點】基因工程的操作過程綜合．
【答案】逆轉(zhuǎn)錄；BamHI和SacI；既可以“縫合”雙鏈DNA片段互補的黏性末端，又可以“縫合“雙鏈DNA片段的平末端；RNA聚合酶；氨芐青霉素；取材方便、無需滅菌、周期短、轉(zhuǎn)化效率高和不定芽能直接再生；抗原—抗體雜交；霉菌接種實驗
【解答】
【點評】
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發(fā)布：2024/4/20 14:35:0組卷：8引用：3難度：0.6
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1．下列有關(guān)基因工程技術(shù)和蛋白質(zhì)工程技術(shù)敘述正確的是（ ?。?/h2>
發(fā)布：2025/1/5 8:0:1組卷：6引用：1難度：0.7 -
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3．幾丁質(zhì)是許多真菌細胞壁的重要成分，幾丁質(zhì)酶可催化幾丁質(zhì)水解。通過基因工程將幾丁質(zhì)酶基因轉(zhuǎn)入植物體內(nèi)，可增強其抗真菌病的能力。回答下列問題：
（1）基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以從基因文庫中獲得。基因文庫包括和。
（2）生物體細胞內(nèi)的DNA復制開始時，解開DNA雙鏈的酶是。在體外利用PCR技術(shù)擴增目的基因時，使反應(yīng)體系中的模板DNA解鏈為單鏈的條件是。上述兩個解鏈過程的共同點是破壞了DNA雙鏈分子中的。
（3）DNA連接酶是將兩個DNA片段連接起來的酶，常見的有和，其中既能連接黏性末端又能連接平末端的是。當幾丁質(zhì)酶基因和質(zhì)粒載體連接時，DNA連接酶催化形成的化學鍵是。
（4）提取RNA時，提取液中需添加RNA酶抑制劑，其目的是。
（5）若獲得的轉(zhuǎn)基因植株（幾丁質(zhì)酶基因已經(jīng)整合到植物的基因組中）抗真菌病的能力沒有提高，根據(jù)中心法則分析，其可能的原因是。發(fā)布：2025/1/5 8:0:1組卷：2引用：2難度：0.6
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