基因敲除又稱(chēng)基因打靶，該技術(shù)通過(guò)外源DNA與染色體DNA之間的同源重組，進(jìn)行精確的定點(diǎn)修飾和基因改造，具有專(zhuān)一性強(qiáng)、染色體DNA可與目的片段共同穩(wěn)定遺傳等特點(diǎn)?？捎糜诨蚬δ艿难芯亢蛦位蜻z傳病的治療。為研究小鼠細(xì)胞中基因X的功能，科學(xué)家通過(guò)同源重組法將小鼠胚胎干細(xì)胞中的基因X的活性消除并獲得嵌合體小鼠。在制備置換載體時(shí)，將neor基因（抗新霉素基因）作為置換基因X的插入突變，同時(shí)在neor基因外側(cè)添加HSV-tk基因，該基因的表達(dá)產(chǎn)物能將DHPG轉(zhuǎn)化為有毒物質(zhì)而使細(xì)胞死亡，如圖甲所示。置換載體導(dǎo)入ES細(xì)胞后，可發(fā)生同源重組和非同源重組，如圖乙所示。
（1）根據(jù)圖甲可知，在構(gòu)建基因X的置換載體時(shí)，需用相同的限制酶限制酶酶切割基因X和neor基因neor基因，該酶的切割位點(diǎn)應(yīng)位于基因X的內(nèi)部和neor基因的兩端基因X的內(nèi)部和neor基因的兩端，用相同酶切的目的是產(chǎn)生相同的黏性末端，便于被DNA連接酶連接產(chǎn)生相同的黏性末端，便于被DNA連接酶連接。
（2）ES細(xì)胞在功能上具有的特征是發(fā)育的全能性發(fā)育的全能性，常用顯微注射顯微注射技術(shù)將置換載體導(dǎo)入ES細(xì)胞，將置換載體導(dǎo)入ES細(xì)胞后，如何將發(fā)生同源重組的ES細(xì)胞篩選出來(lái)？并簡(jiǎn)述理由。方法：在培養(yǎng)基中加入新霉素和DHPG，培養(yǎng)導(dǎo)入置換載體的細(xì)胞在培養(yǎng)基中加入新霉素和DHPG，培養(yǎng)導(dǎo)入置換載體的細(xì)胞；理由：未成功導(dǎo)入的ES細(xì)胞中不含neor基因，不抗新霉素，所以在培養(yǎng)基中無(wú)法存活。成功導(dǎo)入，但發(fā)生非同源重組的ES細(xì)胞中，HSK-tk基因可以表達(dá)，其產(chǎn)物會(huì)將培養(yǎng)基中的DHPG轉(zhuǎn)化為有毒物質(zhì)從而殺死ES細(xì)胞。只有發(fā)生同源重組的細(xì)胞，含有neor基因，同時(shí)無(wú)HSV-tk基因，可以在培養(yǎng)基中存活未成功導(dǎo)入的ES細(xì)胞中不含neor基因，不抗新霉素，所以在培養(yǎng)基中無(wú)法存活。成功導(dǎo)入，但發(fā)生非同源重組的ES細(xì)胞中，HSK-tk基因可以表達(dá)，其產(chǎn)物會(huì)將培養(yǎng)基中的DHPG轉(zhuǎn)化為有毒物質(zhì)從而殺死ES細(xì)胞。只有發(fā)生同源重組的細(xì)胞，含有neor基因，同時(shí)無(wú)HSV-tk基因，可以在培養(yǎng)基中存活。
（3）將嵌合體胚胎移植到受體小鼠并能在受體小鼠內(nèi)存活的原因是：受體對(duì)外來(lái)胚胎基本上不發(fā)生免疫排斥反應(yīng)受體對(duì)外來(lái)胚胎基本上不發(fā)生免疫排斥反應(yīng)。
【考點(diǎn)】基因工程的操作過(guò)程綜合．
【答案】限制酶；neor基因；基因X的內(nèi)部和neor基因的兩端；產(chǎn)生相同的黏性末端，便于被DNA連接酶連接；發(fā)育的全能性；顯微注射；在培養(yǎng)基中加入新霉素和DHPG，培養(yǎng)導(dǎo)入置換載體的細(xì)胞；未成功導(dǎo)入的ES細(xì)胞中不含neor基因，不抗新霉素，所以在培養(yǎng)基中無(wú)法存活。成功導(dǎo)入，但發(fā)生非同源重組的ES細(xì)胞中，HSK-tk基因可以表達(dá)，其產(chǎn)物會(huì)將培養(yǎng)基中的DHPG轉(zhuǎn)化為有毒物質(zhì)從而殺死ES細(xì)胞。只有發(fā)生同源重組的細(xì)胞，含有neor基因，同時(shí)無(wú)HSV-tk基因，可以在培養(yǎng)基中存活；受體對(duì)外來(lái)胚胎基本上不發(fā)生免疫排斥反應(yīng)
【解答】
【點(diǎn)評(píng)】
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發(fā)布：2024/6/27 10:35:59組卷：28引用：1難度：0.6
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1．下列有關(guān)基因工程技術(shù)和蛋白質(zhì)工程技術(shù)敘述正確的是（ ?。?/h2>
發(fā)布：2025/1/5 8:0:1組卷：6引用：1難度：0.7 -
2．下列有關(guān)基因工程的敘述，正確的是（ ）
發(fā)布：2024/12/31 5:0:5組卷：3引用：2難度：0.7 -
3．幾丁質(zhì)是許多真菌細(xì)胞壁的重要成分，幾丁質(zhì)酶可催化幾丁質(zhì)水解。通過(guò)基因工程將幾丁質(zhì)酶基因轉(zhuǎn)入植物體內(nèi)，可增強(qiáng)其抗真菌病的能力?；卮鹣铝袉?wèn)題：
（1）基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以從基因文庫(kù)中獲得?；蛭膸?kù)包括和。
（2）生物體細(xì)胞內(nèi)的DNA復(fù)制開(kāi)始時(shí)，解開(kāi)DNA雙鏈的酶是。在體外利用PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因時(shí)，使反應(yīng)體系中的模板DNA解鏈為單鏈的條件是。上述兩個(gè)解鏈過(guò)程的共同點(diǎn)是破壞了DNA雙鏈分子中的。
（3）DNA連接酶是將兩個(gè)DNA片段連接起來(lái)的酶，常見(jiàn)的有和，其中既能連接黏性末端又能連接平末端的是。當(dāng)幾丁質(zhì)酶基因和質(zhì)粒載體連接時(shí)，DNA連接酶催化形成的化學(xué)鍵是。
（4）提取RNA時(shí)，提取液中需添加RNA酶抑制劑，其目的是。
（5）若獲得的轉(zhuǎn)基因植株（幾丁質(zhì)酶基因已經(jīng)整合到植物的基因組中）抗真菌病的能力沒(méi)有提高，根據(jù)中心法則分析，其可能的原因是。發(fā)布：2025/1/5 8:0:1組卷：2引用：2難度：0.6
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