非洲豬瘟是由非洲豬瘟病毒（ASFV）感染家豬和野豬引起的一種高致病性傳染病?？蒲腥藛T在病毒ASFV的K基因（大小為790bp）中間插入熒光素酶基因（Gluc基因）和增強型綠色熒光蛋白基因（EGFP基因），從而構建可以進行快速觀察及定量檢測酶活性的重組病毒（ASFV-Gluc-EGFP）體系，如圖1所示?；卮鹣铝袉栴}：
（1）構建重組病毒時用的HindⅢ和BamHⅠ都是 限制性核酸內切（或限制）限制性核酸內切（或限制）酶。
（2）為了初步鑒定重組病毒是否構建成功，科研人員提取病毒DNA，選用引物組合 引物1和引物4引物1和引物4進行PCR擴增，擴增結果有1、2兩種類型，如圖2所示。該實驗結果表明Gluc基因和EGFP基因 有有（填“有”或“沒有”）插入病毒ASFV的K基因。
（3）為了進一步驗證重組病毒是否成功表達，科研人員將豬肺泡巨噬細胞（PAMS）培養(yǎng)一段時間后，平均分成A、B兩組，其中A組接種病毒ASFV，B組接種 重組病毒重組病毒。支持“重組病毒成功表達”的實驗結果為：B組可觀察到綠色熒光，檢測到熒光素酶有活性；A組無熒光，熒光素酶無活性B組可觀察到綠色熒光，檢測到熒光素酶有活性；A組無熒光，熒光素酶無活性。
（4）同時，科研人員又分別測定了A、B兩組的病毒數(shù)量變化，發(fā)現(xiàn)兩者無顯著差異，該結果表明 Gluc基因和EGFP基因的插入不影響病毒的復制Gluc基因和EGFP基因的插入不影響病毒的復制。因此，該重組病毒體系的構建可為后續(xù)研究ASFV的致病機制及藥物治療奠定基礎。
【答案】限制性核酸內切（或限制）；引物1和引物4；有；重組病毒；B組可觀察到綠色熒光，檢測到熒光素酶有活性；A組無熒光，熒光素酶無活性；Gluc基因和EGFP基因的插入不影響病毒的復制
【解答】
【點評】
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發(fā)布：2024/4/20 14:35:0組卷：65引用：5難度：0.7
相似題
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1．學習以下材料，回答（1）～（4）題。
利用抑制性tRNA進行無義突變遺傳病的治療
無義突變是由于某個堿基的改變使代表某種氨基酸的密碼子突變?yōu)榻K止密碼子（UAA、UAG或UGA），從而使肽鏈合成提前終止，造成蛋白質的功能改變，引發(fā)相關疾病。約有10%～15%的人類基因相關遺傳疾病是由無義突變引發(fā)的。常規(guī)的基因治療是將正?；虻腸DNA序列或是有治療價值的基因（如CRISPR-Cas9相關的基因編輯工具）通過一定的方式導入人體靶細胞內，達到替代或修復缺陷基因、治療疾病的目的。導入基因插入位置不當、過高或過低表達，都可能會導致副作用。盡管基因編輯可以實現(xiàn)生理水平的基因表達，但基因編輯工具引入外源蛋白可能引發(fā)強烈的免疫反應仍然是巨大的挑戰(zhàn)。
抑制性tRNA（sup-tRNA）由天然tRNA改造而來，它的反密碼子通過堿基配對原則可以識別無義突變的終止密碼子，使得mRNA在翻譯至無義突變位點時不啟動翻譯終止而是繼續(xù)向后進行翻譯，獲得有功能的全長蛋白。
I型黏多糖貯積癥的病因，是相關基因發(fā)生無義突變，產生終止密碼子UAG。研究者構建小鼠該突變基因mldua和Flag基因融合的載體（圖1），以及針對該無義突變設計的sup-tRNA表達載體（產生的sup-tRNA能夠識別UAG并攜帶酪氨酸Tyr,簡寫作sup-tRNATyr），將其導入細胞進行研究，發(fā)現(xiàn)與具有相似作用的化合物G418比較，sup--tRNA的作用更加顯著（圖2）；進一步利用重組腺相關病毒作為載體將sup-tRNA導入患病小鼠模型中，實驗顯示能夠降低黏多糖過度積存，實現(xiàn)對該病癥的有效治療，其療效可以持續(xù)半年以上。
從整體來看，G418在促進跨越無義突變位點繼續(xù)翻譯時引入的氨基酸較為隨機，而sup-tRNA引入的氨基酸較為單一，且不會影響內源tRNA穩(wěn)態(tài)，所以sup-tRNA在個體治療中具有很高的安全性，因而在未來基因突變引起的疾病相關治療中具有非常大的應用前景。
（1）侵染時，作為載體的重組腺相關病毒與靶細胞膜上的發(fā)生識別，引發(fā)內吞，進入細胞后釋放單鏈DNA作為模板，利用宿主細胞的催化合成其互補DNA鏈，再經過過程產生sup-tRNA。
（2）除了引入的氨基酸較為單一，不影響內源tRNA穩(wěn)態(tài)，我們還可推斷，用于治療的sup-tRNA在正常終止密碼子處（填“能”或“不能”）繼續(xù)往后翻譯，具有很高的安全性。
（3）研究者構建mldua突變基因和Flag基因融合的載體，目的是通過檢測來確定是否跨越無義突變位點繼續(xù)向后翻譯。實驗結果表明，相比于化合物G418，sup-tRNA在促進無義突變位點的翻譯方面更加有效，支持這一結論的依據(jù)是：。
（4）有文獻報道，已在近1000個不同的人類基因中發(fā)現(xiàn)了7500多個無義突變。常規(guī)的基因治療需要為每種疾病設計獨特的治療策略，這將是一項耗費驚人的項目。據(jù)此說明sup-tRNA的應用價值。發(fā)布：2025/1/3 8:0:1組卷：26引用：1難度：0.6 -
2．人類基因組計劃測定了人體的24條染色體，這24條染色體是（ ）
發(fā)布：2024/12/31 0:30:1組卷：112引用：7難度：0.7 -
3．幾丁質是許多真菌細胞壁的重要成分，自然界有些植物能產生幾丁質酶催化幾丁質水解從而抵抗真菌感染。通過基因工程將幾丁質酶基因轉入沒有抗性的植物體內，可增強其抗真菌的能力。如圖表示為獲取幾丁質酶基因而建立cDNA文庫的過程。
（1）圖示以mRNA為材料通過法獲得cDNA，該方法依據(jù)的原理是，通過這種方法獲得的基因中因缺乏和結構，導致將其直接導入受體細胞中不能復制和表達。
（2）與選用老葉相比，選用嫩葉更容易提取到mRNA，原因是，且提取RNA時，提取液中需添加RNA酶抑制劑，其目的是。
（3）將從cDNA文庫中獲得的幾丁質酶基因和質粒載體用酶和DNA連接處理后連接起來，構建基因表達載體，DNA連接酶催化形成的化學鍵是。發(fā)布：2025/1/5 8:0:1組卷：5引用：1難度：0.7
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