抗除草劑轉基因作物的推廣可有效減輕除草勞動強度、提高農業(yè)生產效率。圖1為抗除草劑轉基因玉米的技術流程。
（1）構建含除草劑抗性基因的表達載體，傳統(tǒng)的方法是目的基因通過 限制酶、DNA連接限制酶、DNA連接酶與載體進行重組。另外，可通過 PCRPCR技術在目的基因兩側添加相應限制酶識別序列，以便構建表達載體。
（2）科研人員研發(fā)了新的DNA重組方法——無縫克隆In-Fusion技術，如圖2所示。In-Fusion酶能夠識別任何具有相同15bp末端序列的線性DNA分子并使其形成黏性末端，據(jù)此實現(xiàn)目的基因和載體的連接。和傳統(tǒng)方法比，無縫克隆In-Fusion技術的優(yōu)點是 插入位點不受限制酶識別序列限制，實現(xiàn)了目的基因在載體任意位點上的插入插入位點不受限制酶識別序列限制，實現(xiàn)了目的基因在載體任意位點上的插入。
①應用以上方法構建含有A基因和GUS基因的重組DNA分子時，首先獲得了圖3中的3種DNA分子，然后混合進行In-Fusion反應。
如果引物2上額外添加的片段與GUS基因e片段（圖中加粗表示）序列相同，那么引物1和引物4上額外增加的片段分別與載體中的片段（圖中加粗表示） a（d）a（d）、d（a）d（a）相同。完成重組反應后，將表達載體導入農桿菌中。
②為篩選成功轉入目標重組DNA分子的菌落，可以選取引物 1、41、4擴增目的基因并電泳檢測。
（3）農桿菌轉化愈傷組織時，常用含除草劑的選擇培養(yǎng)基篩選轉化的愈傷組織。由于愈傷組織表面常殘留農桿菌，導致未成功轉化的愈傷組織也可能在選擇培養(yǎng)基上生長。針對上述現(xiàn)象，可以在選擇培養(yǎng)基中同時加入 無色物質K無色物質K進行篩選，其中周圍的培養(yǎng)基 顯顯（填“顯”或“不顯”）藍色的愈傷組織是轉化成功的，原因是 轉化成功的愈傷組織中，GUS基因正確表達，表達產物能催化培養(yǎng)基中的無色物質K呈現(xiàn)藍色；農桿菌中的GUS由于含有內含子轉錄序列不能切除，不能正確表達，不能催化培養(yǎng)基中的無色物質K呈現(xiàn)藍色轉化成功的愈傷組織中，GUS基因正確表達，表達產物能催化培養(yǎng)基中的無色物質K呈現(xiàn)藍色；農桿菌中的GUS由于含有內含子轉錄序列不能切除，不能正確表達，不能催化培養(yǎng)基中的無色物質K呈現(xiàn)藍色。
【考點】基因工程的操作過程綜合．
【答案】限制酶、DNA連接；PCR；插入位點不受限制酶識別序列限制，實現(xiàn)了目的基因在載體任意位點上的插入；a（d）；d（a）；1、4；無色物質K；顯；轉化成功的愈傷組織中，GUS基因正確表達，表達產物能催化培養(yǎng)基中的無色物質K呈現(xiàn)藍色；農桿菌中的GUS由于含有內含子轉錄序列不能切除，不能正確表達，不能催化培養(yǎng)基中的無色物質K呈現(xiàn)藍色
【解答】
【點評】
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發(fā)布：2024/6/29 8:0:10組卷：30引用：4難度：0.6
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（1）基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以從基因文庫中獲得?；蛭膸彀?和。
（2）生物體細胞內的DNA復制開始時，解開DNA雙鏈的酶是。在體外利用PCR技術擴增目的基因時，使反應體系中的模板DNA解鏈為單鏈的條件是。上述兩個解鏈過程的共同點是破壞了DNA雙鏈分子中的。
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（4）提取RNA時，提取液中需添加RNA酶抑制劑，其目的是。
（5）若獲得的轉基因植株（幾丁質酶基因已經整合到植物的基因組中）抗真菌病的能力沒有提高，根據(jù)中心法則分析，其可能的原因是。發(fā)布：2025/1/5 8:0:1組卷：2引用：2難度：0.6
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