人體肝臟細(xì)胞中的乙醛脫氫酶2（ALDH2）是人體酒精代謝中的關(guān)鍵酶。如圖表示利用基因工程生產(chǎn)ALDH2過(guò)程中使用的質(zhì)粒及目的基因的部分結(jié)構(gòu)，β-半乳糖苷酶能分解無(wú)色的X-gal產(chǎn)生藍(lán)色物質(zhì)。圖中氨芐青霉素抗性基因、β-半乳糖苷酶基因、目的基因的序列中分別含有1種、5種、2種限制酶的識(shí)別序列及切割位點(diǎn)。

（1）構(gòu)建基因表達(dá)載體時(shí)一般至少需要兩種限制酶，以防止

質(zhì)粒或目的基因自身環(huán)化

質(zhì)?；蚰康幕蜃陨憝h(huán)化

和

目的基因與質(zhì)粒反向連接

目的基因與質(zhì)粒反向連接

。設(shè)計(jì)啟動(dòng)子的作用是

使目的基因正常轉(zhuǎn)錄（表達(dá)）

使目的基因正常轉(zhuǎn)錄（表達(dá)）

。
（2）為了使目的基因與載體能正確連接，應(yīng)在擴(kuò)增的目的基因A、B兩端分別引入

XhoⅠ

XhoⅠ

和

MunⅠ

MunⅠ

兩種不同限制酶的識(shí)別序列。
（3）MunⅠ酶切后的末端與EcoRⅠ酶切后的末端能連接，原因是

MunⅠ酶與EcoRI酶切后的黏性末端相同（可以互補(bǔ)配對(duì)）

MunⅠ酶與EcoRI酶切后的黏性末端相同（可以互補(bǔ)配對(duì)）

。
（4）以大腸桿菌為受體細(xì)胞，在篩選插入ALDH2基因成功的受體細(xì)胞時(shí)，除營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)外，還要在培養(yǎng)基中加入的物質(zhì)有

氨芐青霉素和X-gal

氨芐青霉素和X-gal

。
（5）研究發(fā)現(xiàn)如果將ALDH2的第36位的氨基酸替換，可提高其催化效率。請(qǐng)寫出通過(guò)蛋白質(zhì)工程技術(shù)獲取高效ALDH2基因的操作流程：

從預(yù)期的蛋白質(zhì)功能（高效ALDH2）出發(fā)→設(shè)計(jì)預(yù)期的蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)（高效ALDH2結(jié)構(gòu)）→推測(cè)應(yīng)有的氨基酸序列→找到相對(duì)應(yīng)的脫氧核苷酸序列

從預(yù)期的蛋白質(zhì)功能（高效ALDH2）出發(fā)→設(shè)計(jì)預(yù)期的蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)（高效ALDH2結(jié)構(gòu)）→推測(cè)應(yīng)有的氨基酸序列→找到相對(duì)應(yīng)的脫氧核苷酸序列

。