In-Fusion技術(shù)是一項新型的無縫克隆技術(shù)。該技術(shù)關(guān)鍵是要在目的基因兩端構(gòu)建與線性化質(zhì)粒末端相同的DNA序列（即同源序列，通常為15-20bp），然后用In-Fusion酶處理即可實現(xiàn)無縫連接。它的操作步驟大致為：①利用PCR技術(shù)將質(zhì)粒線性化；
②PCR擴增出兩端含線性化質(zhì)粒同源序列的目的基因；
③目的基因與線性化質(zhì)粒同源區(qū)域在In-Fusion酶作用下形成重組質(zhì)粒；
④將重組質(zhì)粒導(dǎo)入受體細胞。
回答下列問題。
（1）過程①需要用到的酶是 耐高溫的DNA聚合酶耐高溫的DNA聚合酶。過程③中，同源序列1與同源序列2中的堿基序列不同，這樣設(shè)計的好處是 防止目的基因反向連接，防止線性化質(zhì)?；蚰康幕蜃陨憝h(huán)化防止目的基因反向連接，防止線性化質(zhì)?；蚰康幕蜃陨憝h(huán)化。
（2）為保證擴增出兩端含線性化質(zhì)粒同源序列的目的基因，引物A或引物B要依據(jù) 目的基因與質(zhì)粒目的基因與質(zhì)粒序列進行設(shè)計。
（3）若目的基因是氨芐青霉素抗性基因，以大腸桿菌作為受體細胞。為檢測已轉(zhuǎn)化大腸桿菌的抗性效果，在含有氨芐青霉素和不含氨芐青霉素的培養(yǎng)基上分別接種等量的已轉(zhuǎn)化大腸桿菌并培養(yǎng)相同時間，然后采用 稀釋涂布平板稀釋涂布平板法進行計數(shù)，若結(jié)果較真實值偏小，原因是 當(dāng)兩個或多個細胞連在一起時，在平板上觀察到的是一個菌落當(dāng)兩個或多個細胞連在一起時，在平板上觀察到的是一個菌落。
（4）與傳統(tǒng)構(gòu)建重組質(zhì)粒的方法相比，In-Fusion技術(shù)的優(yōu)勢有 不受限制酶酶切位點的限制；可以把目的基因插入任何位點；避免限制酶切割對質(zhì)粒功能區(qū)的破壞不受限制酶酶切位點的限制；可以把目的基因插入任何位點；避免限制酶切割對質(zhì)粒功能區(qū)的破壞。（至少答出兩點）
【考點】基因工程的操作過程綜合．
【答案】耐高溫的DNA聚合酶；防止目的基因反向連接，防止線性化質(zhì)粒或目的基因自身環(huán)化；目的基因與質(zhì)粒；稀釋涂布平板；當(dāng)兩個或多個細胞連在一起時，在平板上觀察到的是一個菌落；不受限制酶酶切位點的限制；可以把目的基因插入任何位點；避免限制酶切割對質(zhì)粒功能區(qū)的破壞
【解答】
【點評】
聲明：本試題解析著作權(quán)屬菁優(yōu)網(wǎng)所有，未經(jīng)書面同意，不得復(fù)制發(fā)布。
發(fā)布：2024/8/9 8:0:9組卷：6引用：2難度：0.6
相似題
-
1．紅細胞生成素（EPO）是人體內(nèi)促進紅細胞生成的一種糖蛋白，可用于治療腎衰性貧血等疾病。由于天然 EPO來源極為有限，某科研團隊采用基因工程培育轉(zhuǎn)基因羊作為乳腺生物反應(yīng)器，使其能合成EPO。下列有關(guān)敘述錯誤的是（ ?。?/h2>
發(fā)布：2024/12/20 5:0:2組卷：35引用：5難度：0.6 -
2．煙草是我國一些地區(qū)的經(jīng)濟作物之一，提高煙草質(zhì)量有利于提高經(jīng)濟收入。我國科研團隊研究了一種轉(zhuǎn)基因抗鹽煙草新品種，抗鹽基因的結(jié)構(gòu)和獲得轉(zhuǎn)基因抗鹽煙草新品種過程（①～⑤）如圖所示?；卮鹣铝袉栴}：
（1）獲得轉(zhuǎn)基因抗鹽煙草新品種過程中應(yīng)用的生物技術(shù)有（答出2項）等。
（2）為確保目的基因定向插入了質(zhì)粒，應(yīng)該選擇（填酶）切割目的基因和質(zhì)粒。在培養(yǎng)基中加入（填“氨芐青霉素”或“四環(huán)素”）對目的基因進行篩選。
（3）培育轉(zhuǎn)基因抗鹽煙草新品種的核心工作是圖中過程（填序號）。過程②③采用的方法是。
（4）⑤過程需要用到等植物激素，在誘導(dǎo)愈傷組織分化成幼苗的過程中，這兩種植物激素的比例會發(fā)生變化，原因是。發(fā)布：2024/12/20 2:30:1組卷：16引用：5難度：0.5 -
3．如表為5種限制酶的識別序列及切割位點，如圖為某種質(zhì)粒和目的基因，箭頭所指為限制酶酶切位點。現(xiàn)要將圖中的目的基因定向插入到質(zhì)粒中，以制備轉(zhuǎn)基因植株。下列說法正確的是（ ）
限制酶 BamHⅠ EcoRⅠ HindⅠ NbeⅠ MunⅠ 識別序列及切割位點 G↓CATCC G↓AATTC A↓AGCTT G↓CTAGC C↓AATTG 
發(fā)布：2024/12/20 3:30:1組卷：6引用：1難度：0.6
把好題分享給你的好友吧~~