某研究人員利用轉(zhuǎn)基因技術(shù)改造乳酸桿菌，將其添加于飼料中，以提高家禽養(yǎng)殖效益。枯草芽孢桿菌可分泌一種可降解纖維素的酶，這種酶由W基因編碼。為在乳酸桿菌中表達(dá)W基因，需以圖1中質(zhì)粒為載體將W基因?qū)肴樗釛U菌，圖2為含W基因的DNA片段。回答下列問題：

（1）采用PCR技術(shù)可以大量擴(kuò)增W基因，該過程包括將W基因解鏈（變性）、

引物與單鏈相應(yīng)互補(bǔ)序列結(jié)合

引物與單鏈相應(yīng)互補(bǔ)序列結(jié)合

（復(fù)性）和在

耐高溫的DNA聚合酶（或Taq酶）

耐高溫的DNA聚合酶（或Taq酶）

作用下合成互補(bǔ)子鏈（延伸）。
（2）不同生物的DNA能夠連接的原因是其分子結(jié)構(gòu)相似、基本組成單位相同且均遵循

堿基互補(bǔ)配對(duì)

堿基互補(bǔ)配對(duì)

原則。將W基因與圖1所示的載體連接前應(yīng)使用限制酶

EcoRI、HindⅢ

EcoRI、HindⅢ

切割圖2中含W基因的DNA片段和載體，相對(duì)于單酶切，這種方法的優(yōu)點(diǎn)是

避免目的基因和載體的自身環(huán)化以及反向連接（合理即可）

避免目的基因和載體的自身環(huán)化以及反向連接（合理即可）

。
（3）所得重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化乳酸桿菌后，使用含

氨芐青霉素

氨芐青霉素

的培養(yǎng)基篩選，以得到轉(zhuǎn)入W基因的乳酸桿菌。由于載體上的啟動(dòng)子往往具有物種特異性，W基因上游的啟動(dòng)子應(yīng)選擇

乳酸桿菌

乳酸桿菌

（填“枯草芽孢桿菌”“乳酸桿菌”或“枯草芽孢桿菌或乳酸桿菌”）的啟動(dòng)子。
（4）為確定只有導(dǎo)入重組質(zhì)粒的乳酸桿菌才具有分解纖維素的能力，研究人員用液體培養(yǎng)基分別培養(yǎng)下表所示菌種，取培養(yǎng)液的上清液測(cè)定酶活力，實(shí)驗(yàn)方案及測(cè)定結(jié)果如下表所示，表中的X應(yīng)為

導(dǎo)入普通質(zhì)粒的乳酸桿菌

導(dǎo)入普通質(zhì)粒的乳酸桿菌

。

菌種	酶活性相對(duì)值
乳酸桿菌	未檢出
X	未檢出
導(dǎo)入了重組質(zhì)粒的乳酸桿菌	0.96