人類γ基因啟動子上游的調(diào)控序列中含有BCL11A蛋白結(jié)合位點，該位點結(jié)合BCLllA蛋白后，γ基因的表達被抑制。通過改變該結(jié)合位點的序列，解除對γ基因表達的抑制，可對某種地中海貧血癥進行基因治療?？蒲腥藛T擴增了γ基因上游不同長度的片段，將這些片段分別插入表達載體中進行轉(zhuǎn)化和熒光檢測，以確定BCL11A蛋白結(jié)合位點的具體位置，相關(guān)信息如圖所示?；卮鹣铝袉栴}：
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（1）為將擴增后的產(chǎn)物定向插入載體指導熒光蛋白基因表達，需在引物末端添加限制酶識別序列。據(jù)圖可知，在F1～F7末端添加的序列所對應(yīng)的限制酶是

SalⅠ

SalⅠ

，在R末端添加的序列所對應(yīng)的限制酶是

EcoRⅠ

EcoRⅠ

。本實驗中，從產(chǎn)物擴增到載體構(gòu)建完成的整個過程共需要

6

6

種酶。
（2）將構(gòu)建的載體導入除去BCL11A基因的受體細胞，成功轉(zhuǎn)化后，含F(xiàn)1～F6與R擴增產(chǎn)物的載體表達熒光蛋白，受體細胞有熒光，含F(xiàn)7與R擴增產(chǎn)物的受體細胞無熒光。含F(xiàn)7與R擴增產(chǎn)物的受體細胞無熒光的原因是

F7與R擴增產(chǎn)物不含完整的啟動子，熒光蛋白基因不表達

F7與R擴增產(chǎn)物不含完整的啟動子，熒光蛋白基因不表達

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（3）向培養(yǎng)液中添加適量的雌激素，含F(xiàn)1～F4與R擴增產(chǎn)物的受體細胞不再有熒光，而含F(xiàn)5～F6與R擴增產(chǎn)物的受體細胞仍有熒光。若γ基因上游調(diào)控序列上與引物序列所對應(yīng)的位置不含有BCL11A蛋白的結(jié)合位點序列，據(jù)此結(jié)果可推測，BCL11A蛋白結(jié)合位點位于

引物F4與F5在調(diào)控序列上所對應(yīng)序列之間的區(qū)段上

引物F4與F5在調(diào)控序列上所對應(yīng)序列之間的區(qū)段上

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