EPO是促紅細(xì)胞生成素的英文簡稱,是一種激素樣蛋白質(zhì)物質(zhì),可促進(jìn)體內(nèi)新紅細(xì)胞生成。人類已可通過基因工程合成EPO基因,并采用中國倉鼠卵巢(CHO)細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)來獲取產(chǎn)物,其過程如圖。請回答下列問題:
(1)從人體組織中提取EPO的mRNA,在 逆轉(zhuǎn)錄逆轉(zhuǎn)錄的作用下可合成EPO基因的cDNA,再通過PCR技術(shù)獲得大量EPO基因,PCR擴(kuò)增時需將溫度調(diào)至55~60℃進(jìn)行復(fù)性,其目的是 使兩種引物通過堿基互補(bǔ)配對與兩條單鏈DNA結(jié)合使兩種引物通過堿基互補(bǔ)配對與兩條單鏈DNA結(jié)合。
(2)為了得到更多的卵母細(xì)胞,可在步驟②對供體母鼠進(jìn)行 超數(shù)排卵(注射促性腺激素)超數(shù)排卵(注射促性腺激素)處理,卵母細(xì)胞培養(yǎng)到 減數(shù)第二次分裂中減數(shù)第二次分裂中期與獲能的精子相遇,精子穿越透明帶,完成體外受精。
(3)為了確保能用倉鼠卵巢(CHO)細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)來獲取產(chǎn)物,步驟①中需要將 EPO基因與倉鼠卵巢細(xì)胞中特異性表達(dá)的基因的啟動子重組在一起EPO基因與倉鼠卵巢細(xì)胞中特異性表達(dá)的基因的啟動子重組在一起,并且基因表達(dá)載體中所含的 啟動子啟動子能驅(qū)動EPO基因的轉(zhuǎn)錄。
(4)若想檢驗(yàn)轉(zhuǎn)基因倉鼠是否成功表達(dá)EPO,可以采用 抗原—抗體雜交抗原—抗體雜交技術(shù)對血液來進(jìn)行檢測。
【答案】逆轉(zhuǎn)錄;使兩種引物通過堿基互補(bǔ)配對與兩條單鏈DNA結(jié)合;超數(shù)排卵(注射促性腺激素);減數(shù)第二次分裂中;EPO基因與倉鼠卵巢細(xì)胞中特異性表達(dá)的基因的啟動子重組在一起;啟動子;抗原—抗體雜交
【解答】
【點(diǎn)評】
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發(fā)布:2024/8/17 6:0:3組卷:0引用:1難度:0.6
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