炎癥性腸病(IBD)是一種易導(dǎo)致結(jié)腸癌的慢性疾病,患者腸道內(nèi)會產(chǎn)生硫代硫酸鹽??蒲腥藛T以小鼠為研究對象,建立了圖1所示的炎癥性腸病檢測模型,GFP基因是綠色熒光蛋白基因。
(1)據(jù)圖分析,可以通過檢測熒光強弱來判定小鼠腸道內(nèi)硫代硫酸鹽的濃度,其原因是 硫代硫酸鹽能夠解除R蛋白對啟動子B的抑制作用,使GFP基因表達,發(fā)出綠色熒光硫代硫酸鹽能夠解除R蛋白對啟動子B的抑制作用,使GFP基因表達,發(fā)出綠色熒光。
(2)研究者利用基因工程技術(shù)構(gòu)建含硫代硫酸鹽檢測傳感器的大腸桿菌工程菌,通過PCR擴增R基因時應(yīng)該選擇的引物是 引物1和引物4引物1和引物4,在A、B兩端引物的5′端需添加的限制酶識別序列為 GGATCCGGATCC和 CTGCAGCTGCAG。
限制酶識別序列和酶切位點如表:
限制酶 | HindⅢ | BamHⅠ | PastⅠ | EcoRⅠ | BglⅡ |
識別序列(5′→3′) | A↓AGCTT | G↓GATCC | C↓TGCAG | G↓AATTC | A↓GATCT |
(3)研究發(fā)現(xiàn)患者腸道內(nèi)硫代硫酸鹽的生成量與疾病嚴重程度呈正相關(guān)。為簡化疾病診斷和精確用藥,科研人員開發(fā)了智能工程菌。科研人員將抗炎蛋白基因與硫代硫酸鹽特異性誘導(dǎo)激活的啟動子P連接,構(gòu)建出圖3所示表達載體(部分片段),導(dǎo)入用
Ca2+
Ca2+
處理的大腸桿菌細胞內(nèi),選用啟動子P的優(yōu)點是 僅在IBD發(fā)生時才表達抗炎蛋白且能精準治療IBD
僅在IBD發(fā)生時才表達抗炎蛋白且能精準治療IBD
。【考點】基因工程的操作過程綜合.
【答案】硫代硫酸鹽能夠解除R蛋白對啟動子B的抑制作用,使GFP基因表達,發(fā)出綠色熒光;引物1和引物4;GGATCC;CTGCAG;Ca2+;僅在IBD發(fā)生時才表達抗炎蛋白且能精準治療IBD
【解答】
【點評】
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