研究者篩選到一株降解纖維素能力較強的枯草芽孢桿菌菌株（B菌），從中獲得一種纖維素酶（C1酶）基因。將C1酶基因與高效表達載體（HT質(zhì)粒）連接，再導入B菌，以期獲得降解纖維素能力更強的工程菌。熒光定量PCR技術可定量檢測樣本中某種DNA含量。其原理是在PCR體系中每加入一對引物的同時加入一個與某條模板鏈互補的熒光探針，當Taq酶催化子鏈延伸至探針處，會水解探針，使熒光監(jiān)測系統(tǒng)接收到熒光信號，即每擴增一次，就有一個熒光分子生成。在檢測過程中，隨著PCR的進行，反應產(chǎn)物不斷累積，“雜交雙鏈”熒光信號的強度也等比例增加?？赏ㄟ^熒光強度的變化監(jiān)測產(chǎn)物量的變化從而得到一條熒光擴增曲線圖（如圖1）。
注：DNA的轉(zhuǎn)錄方向是RNA的合成方向，即5'端到3'端。
回答下列問題：
（1）啟動子的基本組成單位是 脫氧核苷酸脫氧核苷酸，能識別啟動子的酶是 RNA聚合酶RNA聚合酶。
（2）熒光定量PCR儀能監(jiān)測出熒光到達預先設定閾值的循環(huán)數(shù)（Ct值），病毒核酸濃度越高，Ct值越 小小。
（3）“平臺期”出現(xiàn)的最可能的原因是 試劑盒中的原料、引物和探針數(shù)量一定，超出一定循環(huán)數(shù)后，熒光標記的“雜交雙鏈”不再增加試劑盒中的原料、引物和探針數(shù)量一定，超出一定循環(huán)數(shù)后，熒光標記的“雜交雙鏈”不再增加。
（4）圖2中HT質(zhì)粒酶切位點如圖所示，C1酶基因以B鏈為轉(zhuǎn)錄模板鏈，克隆C1酶基因時在其酶切位點1和酶切位點2兩端分別添加 BamHIBamHI和 SmaISmaI，并且二者順序不能調(diào)換的原因是 轉(zhuǎn)錄時mRNA自身延伸方向是5’→3’，使C1酶基因按照正確的方向與已被酶切的HT質(zhì)粒連接轉(zhuǎn)錄時mRNA自身延伸方向是5’→3’，使C1酶基因按照正確的方向與已被酶切的HT質(zhì)粒連接。
（5）預期該工程菌在處理廢棄物以保護環(huán)境方面可能的應用 降解桔桿，減少桔桿燃燒帶來的空氣污染降解桔桿，減少桔桿燃燒帶來的空氣污染。（舉一例）
【考點】DNA片段的擴增與電泳鑒定．
【答案】脫氧核苷酸；RNA聚合酶；小；試劑盒中的原料、引物和探針數(shù)量一定，超出一定循環(huán)數(shù)后，熒光標記的“雜交雙鏈”不再增加；BamHI；SmaI；轉(zhuǎn)錄時mRNA自身延伸方向是5’→3’，使C1酶基因按照正確的方向與已被酶切的HT質(zhì)粒連接；降解桔桿，減少桔桿燃燒帶來的空氣污染
【解答】
【點評】
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發(fā)布：2024/6/6 8:0:9組卷：6引用：1難度：0.6
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1．數(shù)字PCR技術是一種核酸分子絕對定量技術，其原理如圖所示。下列有關敘述正確的是（ ?。?img alt="菁優(yōu)網(wǎng)" src="https://img.jyeoo.net/quiz/images/202204/49/6d911ea3.png" style="vertical-align:middle" />
發(fā)布：2024/12/30 23:30:2組卷：6引用：2難度：0.6 -
2．PCR技術不僅可以擴增目的基因，還可用于定點誘變目的基因等。大引物PCR就是一種定點突變技術。大引物PCR需要用到引物進行兩次PCR，其操作步驟為：
①根據(jù)目的基因序列設計引物，得到兩個常規(guī)引物，分別為常規(guī)上游引物和常規(guī)下游引物；
②根據(jù)突變堿基所處序列位置設計突變上游引物，突變位點位于突變引物序列的中間位置
③由突變上游引物與常規(guī)下游引物進行第一次PCR反應得到下游大引物；
④用得到的下游大引物中和另一個常規(guī)上游引物進行第二次PCR擴增，得到突變目的基因序列。回答下列問題：
（1）PCR擴增的第一步是使雙鏈模板DNA變性。DNA中G+C的含量與變性要求的溫度有關，DNA中G+C的含量越多，要求的變性溫度越高。其原因是。該PCR擴增技術所需的基本條件是種引物、原料、模板、。
（2）在第一次PCR反應中，形成圖示雙鏈DNA至少要經(jīng)過次復制。第一次PCR的產(chǎn)物DNA的條鏈作為第二次PCR所用的引物。與X射線誘變相比，該突變技術的優(yōu)點是。
（3）如果要利用微生物進一步克隆PCR定點誘變產(chǎn)物，其步驟包括：、、微生物的篩選和培養(yǎng)、從菌群中獲取更多目的基因。將獲取目的基因和質(zhì)粒進行連接后，需先用處理農(nóng)桿菌以便將基因表達載體導入馬鈴薯細胞，將馬鈴薯細胞培養(yǎng)成幼苗時經(jīng)過的兩個過程是。檢測目的基因是否在馬鈴薯細胞中轉(zhuǎn)錄出了mRNA，所采用的方法是。發(fā)布：2024/12/30 23:0:2組卷：32引用：3難度：0.6 -
3．下列關于DNA片段擴增及其鑒定的說法錯誤的是（ ?。?/h2>
發(fā)布：2024/12/30 23:30:2組卷：3引用：3難度：0.7
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