[選修3：現(xiàn)代生物科技專題]
蛋白酶抑制劑基因轉(zhuǎn)化是作物抗蟲(chóng)育種的新途徑。某研究團(tuán)隊(duì)將胰蛋白酶抑制劑（NaPI）和胰凝乳蛋白酶抑制劑（StPinlA）的基因單獨(dú)或共同轉(zhuǎn)化棉花，獲得了轉(zhuǎn)基因植株。
回答下列問(wèn)題：
（1）蛋白酶抑制劑的抗蟲(chóng)機(jī)制是

阻斷或減弱消化酶的作用，導(dǎo)致害蟲(chóng)無(wú)法對(duì)外來(lái)蛋白有消化作用而發(fā)育異?；蛩劳?/div>

阻斷或減弱消化酶的作用，導(dǎo)致害蟲(chóng)無(wú)法對(duì)外來(lái)蛋白有消化作用而發(fā)育異?；蛩劳?/div>。
（2）

基因表達(dá)載體的構(gòu)建

基因表達(dá)載體的構(gòu)建

是實(shí)施基因工程的核心。
（3）利用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法時(shí)，必須將目的基因插入到質(zhì)粒的

T-DNA

T-DNA

上，此方法的不足之處是

農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法適用于大多數(shù)雙子葉植物和裸子植物，不適用單子葉植物

農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法適用于大多數(shù)雙子葉植物和裸子植物，不適用單子葉植物

。
（4）為檢測(cè)目的基因在受體細(xì)胞基因組中的整合及其轉(zhuǎn)錄和翻譯，可采用的檢測(cè)技術(shù)有

DNA分子雜交技術(shù)、分子雜交技術(shù)、抗原—抗體雜交技術(shù)

DNA分子雜交技術(shù)、分子雜交技術(shù)、抗原—抗體雜交技術(shù)

（寫出兩點(diǎn)即可）。
（5）確認(rèn)抗蟲(chóng)基因在受體細(xì)胞中穩(wěn)定表達(dá)后，還需進(jìn)一步做抗蟲(chóng)的

接種實(shí)驗(yàn)

接種實(shí)驗(yàn)

以鑒定其抗性程度。圖為三種不同遺傳操作產(chǎn)生的轉(zhuǎn)基因棉花抗蟲(chóng)實(shí)驗(yàn)結(jié)果，據(jù)結(jié)果分析

NaPI+StPinlA

NaPI+StPinlA

（填“NaPI”或“StPinlA”或“NaPI+StPinlA”）轉(zhuǎn)基因棉花的抗蟲(chóng)效果最佳，其原因是

由于導(dǎo)入NaPI+StPinlA抗蟲(chóng)基因后，蟲(chóng)體質(zhì)量輕，蟲(chóng)體不能成活，且棉鈴數(shù)量最多，所以第3組抗蟲(chóng)效果最好

由于導(dǎo)入NaPI+StPinlA抗蟲(chóng)基因后，蟲(chóng)體質(zhì)量輕，蟲(chóng)體不能成活，且棉鈴數(shù)量最多，所以第3組抗蟲(chóng)效果最好

。

（6）基因突變可產(chǎn)生新的等位基因，在自然選擇的作用下，昆蟲(chóng)種群的基因頻率會(huì)發(fā)生

定向改變

定向改變

。導(dǎo)致昆蟲(chóng)朝著一定的方向不斷進(jìn)化。據(jù)此推測(cè)，被蛋白抑制劑基因作物長(zhǎng)期選擇后，某些昆蟲(chóng)具有了抗蛋白酶抑制劑的能力，其分子機(jī)制可能是

DNA分子中發(fā)生堿基對(duì)的替換、增添或缺失

DNA分子中發(fā)生堿基對(duì)的替換、增添或缺失

（寫出兩點(diǎn)即可）。