β-胡蘿卜素可在人體內(nèi)轉(zhuǎn)化為維生素A．普通水稻胚乳細胞中不含β-胡蘿卜素，科研人員利用基因工程技術(shù)培育富含β-胡蘿卜素的第一代“黃金大米”。
（1）培育第一代“黃金大米”時，需要將八氫番茄紅素合成酶（psy）基因和胡蘿卜素脫飽和酶（crtⅠ）基因轉(zhuǎn)入普通水稻，圖1示所需構(gòu)建的重組Ti質(zhì)粒中的重組T-DNA片段。
①要粗提取含psy基因、crtⅠ基因的DNA時，利用了DNA分子的 不溶于酒精、在不同濃度的NaCl溶液中溶解度不同不溶于酒精、在不同濃度的NaCl溶液中溶解度不同物理性質(zhì)。
②利用PCR擴增psy基因、crtⅠ基因時，需要通過控制 溫度溫度的方法使DNA復制在體外反復進行。常采用 瓊脂糖凝膠電泳瓊脂糖凝膠電泳來鑒定PCR產(chǎn)物。
③據(jù)圖分析，構(gòu)建重組T-DNA片段時，依次用限制酶 I-SecⅠ、KpnⅠI-SecⅠ、KpnⅠ和DNA連接酶處理，將psy基因和crtⅠ基因、潮霉素抗性基因接入。
④通過農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法，上述重組Ti質(zhì)粒可以將該T-DNA片段導入水稻細胞并 整合到染色體DNA上整合到染色體DNA上。農(nóng)桿菌純化培養(yǎng)，常用 平板劃線和稀釋涂布平板平板劃線和稀釋涂布平板方法將單個農(nóng)桿菌分散在固體培養(yǎng)基上。
（2）已知潮霉素對原核細胞和真核細胞的生長都有抑制作用，據(jù)此分析重組T-DNA片段中接入潮霉素抗性基因的作用是 篩選轉(zhuǎn)入重組T-DNA的農(nóng)桿菌和含重組T-DNA的水稻篩選轉(zhuǎn)入重組T-DNA的農(nóng)桿菌和含重組T-DNA的水稻。
（3）重組T-DNA片段中啟動子 22是水稻種子的胚乳細胞特異性表達的啟動子。
（4）如圖2示第一代“黃金大米”中細胞內(nèi)β-胡蘿卜素的合成途徑。經(jīng)檢測發(fā)現(xiàn)其細胞內(nèi)β-胡蘿卜素含量不夠高，是八氫番茄紅素含量較低造成的。據(jù)此信息可采取 對psy基因進行誘變或定向改造（從其他生物中篩選），獲得表達產(chǎn)物活性更高的psy基因，進行轉(zhuǎn)基因操作對psy基因進行誘變或定向改造（從其他生物中篩選），獲得表達產(chǎn)物活性更高的psy基因，進行轉(zhuǎn)基因操作措施，以便獲得β-胡蘿卜素含量更高的第二代“黃金大米”。
【答案】不溶于酒精、在不同濃度的NaCl溶液中溶解度不同；溫度；瓊脂糖凝膠電泳；I-SecⅠ、KpnⅠ；整合到染色體DNA上；平板劃線和稀釋涂布平板；篩選轉(zhuǎn)入重組T-DNA的農(nóng)桿菌和含重組T-DNA的水稻；2；對psy基因進行誘變或定向改造（從其他生物中篩選），獲得表達產(chǎn)物活性更高的psy基因，進行轉(zhuǎn)基因操作
【解答】
【點評】
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發(fā)布：2024/6/20 8:0:9組卷：6引用：2難度：0.8
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1．下列有關(guān)基因工程技術(shù)和蛋白質(zhì)工程技術(shù)敘述正確的是（ ?。?/h2>
發(fā)布：2025/1/5 8:0:1組卷：6引用：1難度：0.7 -
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3．幾丁質(zhì)是許多真菌細胞壁的重要成分，幾丁質(zhì)酶可催化幾丁質(zhì)水解。通過基因工程將幾丁質(zhì)酶基因轉(zhuǎn)入植物體內(nèi)，可增強其抗真菌病的能力?；卮鹣铝袉栴}：
（1）基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以從基因文庫中獲得。基因文庫包括和。
（2）生物體細胞內(nèi)的DNA復制開始時，解開DNA雙鏈的酶是。在體外利用PCR技術(shù)擴增目的基因時，使反應體系中的模板DNA解鏈為單鏈的條件是。上述兩個解鏈過程的共同點是破壞了DNA雙鏈分子中的。
（3）DNA連接酶是將兩個DNA片段連接起來的酶，常見的有和，其中既能連接黏性末端又能連接平末端的是。當幾丁質(zhì)酶基因和質(zhì)粒載體連接時，DNA連接酶催化形成的化學鍵是。
（4）提取RNA時，提取液中需添加RNA酶抑制劑，其目的是。
（5）若獲得的轉(zhuǎn)基因植株（幾丁質(zhì)酶基因已經(jīng)整合到植物的基因組中）抗真菌病的能力沒有提高，根據(jù)中心法則分析，其可能的原因是。發(fā)布：2025/1/5 8:0:1組卷：2引用：2難度：0.6
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