干擾素是人體細(xì)胞產(chǎn)生的一種免疫活性物質(zhì)，具有廣泛的抗病毒、抗腫瘤和免疫調(diào)節(jié)活性。某研究小組欲通過基因工程，以酵母菌和CHO細(xì)胞系（由中國倉鼠的卵巢細(xì)胞轉(zhuǎn)化而來）作為受體細(xì)胞分別生產(chǎn)人干擾素，并比較兩種表達(dá)系統(tǒng)生產(chǎn)的產(chǎn)物特點(diǎn)，回答下列問題：
（1）酵母菌培養(yǎng)基的制備：酵母菌是一種真菌，培養(yǎng)基一般采用在豆芽汁中添加蔗糖，其中蔗糖的作用是

提供碳源和能源

提供碳源和能源

；培養(yǎng)基滅菌前要注意調(diào)節(jié)培養(yǎng)基pH至中性偏酸，以滿足酵母菌的生長(zhǎng)；將培養(yǎng)基放入高壓蒸汽滅菌鍋中滅菌，當(dāng)鍋內(nèi)壓力升到

指定壓力

指定壓力

時(shí)開始計(jì)時(shí)，滅菌20分鐘。
（2）酵母菌的誘變和篩選：將酵母菌種進(jìn)行紫外線的誘變后，用稀釋涂布平板法進(jìn)行接種，用

移液器/移液槍/取樣器

移液器/移液槍/取樣器

取梯度稀釋的酵母菌液加到固體培養(yǎng)基上進(jìn)行涂布，為了使涂布均勻，通常進(jìn)行的操作是

轉(zhuǎn)動(dòng)培養(yǎng)皿

轉(zhuǎn)動(dòng)培養(yǎng)皿

。倒置培養(yǎng)24h后，挑選

直徑較大/最大/大

直徑較大/最大/大

的菌落，從而獲得增殖能力強(qiáng)的酵母菌，再接種至液體培養(yǎng)基進(jìn)行擴(kuò)大培養(yǎng)。
（3）制備CHO細(xì)胞系，需要經(jīng)過多次

傳代

傳代

培養(yǎng)后獲得，由于這種細(xì)胞系仍保留

接觸抑制

接觸抑制

特性，依然存在細(xì)胞的增殖隨細(xì)胞密度增加而逐漸停止的現(xiàn)象。
（4）轉(zhuǎn)基因操作過程：
①目的基因常用PCR擴(kuò)增大量獲取，進(jìn)行PCR操作前必須先設(shè)計(jì)兩種引物，兩種引物不能有

配對(duì)的序列/部分堿基互補(bǔ)的序列

配對(duì)的序列/部分堿基互補(bǔ)的序列

，防止引物相互雜交；為了使擴(kuò)增的目的基因兩側(cè)有某種限制酶識(shí)別序列，對(duì)引物的要求是

一對(duì)引物均帶有該限制酶識(shí)別序列

一對(duì)引物均帶有該限制酶識(shí)別序列

。
②構(gòu)建重組DNA時(shí)，通常選擇改造的質(zhì)粒作為載體，經(jīng)過酶切處理的干擾素基因與質(zhì)粒在DNA連接酶作用下形成重組DNA，為了提高獲得重組DNA的效率，除了考慮適宜的外界條件、目的基因和質(zhì)粒的濃度和DNA連接酶活性外，還需考慮

質(zhì)粒的純度、黏性末端的種類和長(zhǎng)度、DNA連接酶濃度

質(zhì)粒的純度、黏性末端的種類和長(zhǎng)度、DNA連接酶濃度

（至少答兩點(diǎn)）。
③將重組DNA通過

顯微注射

顯微注射

法導(dǎo)入到酵母菌和CHO細(xì)胞中，篩選后進(jìn)行

液體懸浮

液體懸浮

培養(yǎng)獲取目標(biāo)產(chǎn)物。