二十碳五烯酸（EPA）能促進(jìn)體內(nèi)飽和脂肪酸代謝，是人體自身不能直接從頭合成但又不可缺少的營(yíng)作物質(zhì)。獲取EPA產(chǎn)品的主要途徑是從魚油等海洋漁業(yè)資源中提取。研究人員利用轉(zhuǎn)基因技術(shù)從海洋細(xì)菌中提取了EPA合成途徑的關(guān)鍵基因pfaB，并將其導(dǎo)入酵母菌內(nèi)，通過酵母菌發(fā)酵生產(chǎn)EPA，相關(guān)過程如圖所示，請(qǐng)回答下列問題：
（1）利用PCR擴(kuò)增pfaB基因前，需設(shè)計(jì)引物 ①④①④（填序號(hào)），在第 三三輪循環(huán)產(chǎn)物中開始出現(xiàn)兩條脫氧核苷酸鏈等長(zhǎng)的DNA片段（pfaB基因）。
（2）利用PCR擴(kuò)增pfaB基因時(shí)，需將溫度上升到90℃后再降溫至50℃，其目的是 使pfaB基因雙鏈解旋為單鏈后，便于引物與模板鏈通過堿基互補(bǔ)配對(duì)原則結(jié)合使pfaB基因雙鏈解旋為單鏈后，便于引物與模板鏈通過堿基互補(bǔ)配對(duì)原則結(jié)合。將pfaB基因連接在pPIC9質(zhì)粒上時(shí)所用的酶是 DNA連接酶（和限制酶）DNA連接酶（和限制酶）。
（3）將pfaB-pPIC9表達(dá)載體導(dǎo)入酵母菌前，需先將表達(dá)載體導(dǎo)入大腸桿菌并進(jìn)行篩選，篩選時(shí)培養(yǎng)基中應(yīng)加入 氨芐青霉素氨芐青霉素，再將含有表達(dá)載體的大腸桿菌與酵母菌置于電轉(zhuǎn)杯中，通過電激將大腸桿菌導(dǎo)入酵母菌，該表達(dá)載體在酵母菌中不會(huì)隨著酵母菌繁殖而丟失的原因是 表達(dá)載體上含有真核生物復(fù)制原點(diǎn)，能在酵母菌中復(fù)制表達(dá)載體上含有真核生物復(fù)制原點(diǎn)，能在酵母菌中復(fù)制。
【考點(diǎn)】基因工程的操作過程綜合；DNA片段的擴(kuò)增與電泳鑒定．
【答案】①④；三；使pfaB基因雙鏈解旋為單鏈后，便于引物與模板鏈通過堿基互補(bǔ)配對(duì)原則結(jié)合；DNA連接酶（和限制酶）；氨芐青霉素；表達(dá)載體上含有真核生物復(fù)制原點(diǎn)，能在酵母菌中復(fù)制
【解答】
【點(diǎn)評(píng)】
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發(fā)布：2024/4/20 14:35:0組卷：23引用：2難度：0.6
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1．下列有關(guān)基因工程技術(shù)和蛋白質(zhì)工程技術(shù)敘述正確的是（ ?。?/h2>
發(fā)布：2025/1/5 8:0:1組卷：6引用：1難度：0.7 -
2．下列有關(guān)基因工程的敘述，正確的是（ ?。?/h2>
發(fā)布：2024/12/31 5:0:5組卷：3引用：2難度：0.7 -
3．幾丁質(zhì)是許多真菌細(xì)胞壁的重要成分，幾丁質(zhì)酶可催化幾丁質(zhì)水解。通過基因工程將幾丁質(zhì)酶基因轉(zhuǎn)入植物體內(nèi)，可增強(qiáng)其抗真菌病的能力?；卮鹣铝袉栴}：
（1）基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以從基因文庫(kù)中獲得?；蛭膸?kù)包括和。
（2）生物體細(xì)胞內(nèi)的DNA復(fù)制開始時(shí)，解開DNA雙鏈的酶是。在體外利用PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因時(shí)，使反應(yīng)體系中的模板DNA解鏈為單鏈的條件是。上述兩個(gè)解鏈過程的共同點(diǎn)是破壞了DNA雙鏈分子中的。
（3）DNA連接酶是將兩個(gè)DNA片段連接起來的酶，常見的有和，其中既能連接黏性末端又能連接平末端的是。當(dāng)幾丁質(zhì)酶基因和質(zhì)粒載體連接時(shí)，DNA連接酶催化形成的化學(xué)鍵是。
（4）提取RNA時(shí)，提取液中需添加RNA酶抑制劑，其目的是。
（5）若獲得的轉(zhuǎn)基因植株（幾丁質(zhì)酶基因已經(jīng)整合到植物的基因組中）抗真菌病的能力沒有提高，根據(jù)中心法則分析，其可能的原因是。發(fā)布：2025/1/5 8:0:1組卷：2引用：2難度：0.6
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