干燥綜合征（SS）是臨床常見的一種自身免疫病，患者血清中存在多種抗體，其中以SSB抗體特異性最強(qiáng)。如圖表示科研人員利用基因工程技術(shù)獲得SSB蛋白及利用SSB蛋白對小鼠進(jìn)行免疫的過程?；卮鹣铝袉栴}：
（1）利用RNA通過①過程獲得cDNA需要 逆轉(zhuǎn)錄逆轉(zhuǎn)錄酶。已知真核生物mRNA在3'端加有PolyA（多聚腺嘌呤核糖核苷酸）保護(hù)尾部不被降解。為了針對性獲得cDNA，應(yīng)如何設(shè)計(jì)逆轉(zhuǎn)錄第一步時(shí)的DNA引物 用多聚胸腺嘧啶脫氧核苷酸序列為引物用多聚胸腺嘧啶脫氧核苷酸序列為引物，設(shè)計(jì)引物的目的是 使DNA聚合酶能夠從引物的3'端開始連接脫氧核苷酸使DNA聚合酶能夠從引物的3'端開始連接脫氧核苷酸。
（2）為確保與pET41a質(zhì)粒定向連接，對逆轉(zhuǎn)錄得到的cDNA擴(kuò)增時(shí)，應(yīng)在相應(yīng)引物的 5’5’（填“5'”或“3'”）端加上 BamHⅠ和XhoIBamHⅠ和XhoI酶切位點(diǎn)。
（3）③過程用重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染大腸桿菌時(shí)，需要用Ca2+處理大腸桿菌，目的是 使大腸桿菌成為易于吸收外源DNA的狀態(tài)使大腸桿菌成為易于吸收外源DNA的狀態(tài)，然后將處理后的大腸桿菌先接種在添加 卡那霉素卡那霉素的培養(yǎng)基（A）上培養(yǎng)，待長出菌落后再利用無菌膜同位置轉(zhuǎn)移到添加 氯霉素氯霉素的培養(yǎng)基（B）上培養(yǎng)，收集 能在含卡那霉素的培養(yǎng)基上生長而不能在含氯霉素的培養(yǎng)基上生長的能在含卡那霉素的培養(yǎng)基上生長而不能在含氯霉素的培養(yǎng)基上生長的菌落進(jìn)一步純化后將菌體破碎處理，篩選得到SSB蛋白。
（4）將改造后的大腸桿菌生產(chǎn)的SSB蛋白注入到小鼠體內(nèi)是為了檢測該蛋白是否具有抗原性，則后續(xù)實(shí)驗(yàn)內(nèi)容應(yīng)為抽取小鼠血液 提取其中的抗體，利用抗原—抗體雜交的方法檢測其是否含有抗SSB的抗體提取其中的抗體，利用抗原—抗體雜交的方法檢測其是否含有抗SSB的抗體。
【考點(diǎn)】基因工程的操作過程綜合；基因工程在農(nóng)牧、醫(yī)療、食品等方面的應(yīng)用．
【答案】逆轉(zhuǎn)錄；用多聚胸腺嘧啶脫氧核苷酸序列為引物；使DNA聚合酶能夠從引物的3'端開始連接脫氧核苷酸；5’；BamHⅠ和XhoI；使大腸桿菌成為易于吸收外源DNA的狀態(tài)；卡那霉素；氯霉素；能在含卡那霉素的培養(yǎng)基上生長而不能在含氯霉素的培養(yǎng)基上生長的；提取其中的抗體，利用抗原—抗體雜交的方法檢測其是否含有抗SSB的抗體
【解答】
【點(diǎn)評】
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發(fā)布：2024/5/4 8:0:8組卷：68引用：3難度：0.4
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1．下列有關(guān)基因工程技術(shù)和蛋白質(zhì)工程技術(shù)敘述正確的是（ ?。?/h2>
發(fā)布：2025/1/5 8:0:1組卷：6引用：1難度：0.7 -
2．下列有關(guān)基因工程的敘述，正確的是（ ）
發(fā)布：2024/12/31 5:0:5組卷：3引用：2難度：0.7 -
3．幾丁質(zhì)是許多真菌細(xì)胞壁的重要成分，幾丁質(zhì)酶可催化幾丁質(zhì)水解。通過基因工程將幾丁質(zhì)酶基因轉(zhuǎn)入植物體內(nèi)，可增強(qiáng)其抗真菌病的能力。回答下列問題：
（1）基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以從基因文庫中獲得。基因文庫包括和。
（2）生物體細(xì)胞內(nèi)的DNA復(fù)制開始時(shí)，解開DNA雙鏈的酶是。在體外利用PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因時(shí)，使反應(yīng)體系中的模板DNA解鏈為單鏈的條件是。上述兩個(gè)解鏈過程的共同點(diǎn)是破壞了DNA雙鏈分子中的。
（3）DNA連接酶是將兩個(gè)DNA片段連接起來的酶，常見的有和，其中既能連接黏性末端又能連接平末端的是。當(dāng)幾丁質(zhì)酶基因和質(zhì)粒載體連接時(shí)，DNA連接酶催化形成的化學(xué)鍵是。
（4）提取RNA時(shí)，提取液中需添加RNA酶抑制劑，其目的是。
（5）若獲得的轉(zhuǎn)基因植株（幾丁質(zhì)酶基因已經(jīng)整合到植物的基因組中）抗真菌病的能力沒有提高，根據(jù)中心法則分析，其可能的原因是。發(fā)布：2025/1/5 8:0:1組卷：2引用：2難度：0.6
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