蘇云金芽孢桿菌中含有一種抗蟲基因(Bt基因),通過產(chǎn)生蘇云金芽孢桿菌伴孢晶體蛋白(Bt抗蟲蛋白),破壞鱗翅目昆蟲的消化系統(tǒng)來殺死棉鈴蟲??茖W(xué)家將該細(xì)菌的“殺蟲基因”轉(zhuǎn)移到棉花里,培育出了抗蟲棉,讓棉花也能產(chǎn)生Bt抗蟲蛋白抵抗蟲害。如圖中箭頭處為EcoRⅠ或BamHⅠ限制酶的酶切位點(diǎn),回答下列問題:
(1)基因工程中把Bt基因稱為 目的基因目的基因,可利用PCR技術(shù)獲取并擴(kuò)增B基因,前提是要有一段已知的Bt基因的核苷酸序列,這是因?yàn)?利用PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因需要兩種引物,合成引物的前提是要有一段已知目的基因的核苷酸序列利用PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因需要兩種引物,合成引物的前提是要有一段已知目的基因的核苷酸序列。
(2)構(gòu)建重組質(zhì)粒時,可將Bt基因連接到質(zhì)粒的T-DNA序列中,這樣做的意義是 T-DNA序列可將目的基因整合到宿主細(xì)胞的染色體DNA上T-DNA序列可將目的基因整合到宿主細(xì)胞的染色體DNA上。
(3)實(shí)際操作中,一般采用EcoRⅠ和BamHⅠ兩種酶進(jìn)行切割。與只采用EcoRⅠ酶切割相比,用兩種酶切割的優(yōu)勢:一是避免 目的基因和質(zhì)粒自身環(huán)化目的基因和質(zhì)粒自身環(huán)化,二是避免 造成反向連接造成反向連接。
(4)檢測到Bt基因?qū)胨拗骷?xì)胞后還要檢測目的基因是否表達(dá)Bt毒蛋白,常用的方法是 抗原─抗體雜交抗原─抗體雜交,轉(zhuǎn)基因棉花是否培育成功還要對棉花進(jìn)行 抗蟲接種抗蟲接種檢驗(yàn)。
【考點(diǎn)】基因工程的操作過程綜合.
【答案】目的基因;利用PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因需要兩種引物,合成引物的前提是要有一段已知目的基因的核苷酸序列;T-DNA序列可將目的基因整合到宿主細(xì)胞的染色體DNA上;目的基因和質(zhì)粒自身環(huán)化;造成反向連接;抗原─抗體雜交;抗蟲接種
【解答】
【點(diǎn)評】
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