食物中生物胺過(guò)量會(huì)引起頭痛、胃腸道不適和過(guò)敏等不良反應(yīng)，嚴(yán)重時(shí)甚至危及生命，因此必須對(duì)食品中生物胺的含量進(jìn)行監(jiān)控。來(lái)自微生物的多銅氧化酶（MCO）能高效分解生物胺，我國(guó)科研人員將發(fā)酵乳桿菌的MCO基因轉(zhuǎn)入大腸桿菌中，實(shí)現(xiàn)了多銅氧化酶的規(guī)模化生產(chǎn)?；卮鹣铝袉?wèn)題：
（1）上述生物工程的基本步驟包括：①?gòu)陌l(fā)酵乳桿菌中獲取目的基因→②

構(gòu)建基因表達(dá)載體

構(gòu)建基因表達(dá)載體

→③將目的基因?qū)氪竽c桿菌細(xì)胞→④篩選和鑒定含目的基因的受體細(xì)胞→⑤借助

發(fā)酵

發(fā)酵

工程規(guī)?；a(chǎn)目標(biāo)蛋白
（2）在使用PCR技術(shù)擴(kuò)增獲取的MCO基因時(shí)，引物的功能是

使DNA聚合酶能夠從引物的3'端開(kāi)始連接脫氧核苷酸

使DNA聚合酶能夠從引物的3'端開(kāi)始連接脫氧核苷酸

。
（3）在常規(guī)PCR的每一輪擴(kuò)增反應(yīng)中，溫度隨時(shí)間的高低變化順序是

C

C

。

（4）若目的基因MCO經(jīng)限制酶切開(kāi)后呈如圖所示的末端，那么載體質(zhì)粒pCLY15需用

KpnⅠ

KpnⅠ

和

XmaⅠ

XmaⅠ

切開(kāi)，才能與MCO片段高效連接。

（5）為了鑒別載體質(zhì)粒pCLY15空載還是“滿(mǎn)載”，某同學(xué)在選擇培養(yǎng)基中添加X(jué)—gal試劑，以培養(yǎng)微生物后菌落的顏色進(jìn)行鑒別，他能達(dá)到目的嗎？

可以

可以

，原因是

構(gòu)建表達(dá)成功的重組質(zhì)粒中β—lacZ基因被破壞所以不顯色，而沒(méi)有構(gòu)建成功的質(zhì)粒β—lacZ基因未破壞，所以會(huì)顯色

構(gòu)建表達(dá)成功的重組質(zhì)粒中β—lacZ基因被破壞所以不顯色，而沒(méi)有構(gòu)建成功的質(zhì)粒β—lacZ基因未破壞，所以會(huì)顯色

。