苯丙酮尿癥是單基因遺傳病，科學(xué)家將正常基因D導(dǎo)入該病患者的細胞，以治療該病。圖甲為A、B、C三種質(zhì)粒，圖乙為含有目的基因D的DNA片段，圖丙為重組載體的示意圖。Ap為氨芐青霉素抗性基因，Tc為四環(huán)素抗性基因，LacZ基因編碼產(chǎn)生的酶可以分解物質(zhì)X-gal,從而使菌落顯現(xiàn)出藍色。若無該基因或該基因被破壞，則菌落呈白色。，EcoRI（0.6Kb）、PvuI（0.8Kb）為限制酶及其切割位點與復(fù)制原點之間的距離?；卮鹣铝袉栴}：

（1）基因工程操作的核心步驟是

基因表達載體的構(gòu)建

基因表達載體的構(gòu)建

。圖甲中三種質(zhì)粒適宜作為運載體的是質(zhì)粒

B

B

。
（2）獲取目的基因D時應(yīng)選擇乙圖中的

PvuⅠ

PvuⅠ

對其所在的DNA進行切割。
（3）將目的基因D和甲圖中相應(yīng)質(zhì)粒連接后，得到圖丙中三種方式。為選出正向連接的重組質(zhì)粒，使用

EcoRⅠ

EcoRⅠ

對質(zhì)粒完全酶切后，進行電泳分析。若是正向連接載體，電泳圖譜中出現(xiàn)長度為

1.2

1.2

Kb和

5.5

5.5

Kb兩條帶。
（4）利用自身不含lacZ基因且對抗生素敏感的大腸桿菌作為受體細胞，要在已轉(zhuǎn)化的含重組質(zhì)粒、已轉(zhuǎn)化的含空質(zhì)粒的受體細胞和未轉(zhuǎn)化成功的細胞中篩選出已轉(zhuǎn)化的含重組質(zhì)粒的受體細胞的方法是在含有

氨芐青霉素

氨芐青霉素

和

X-gal

X-gal

的培養(yǎng)基上培養(yǎng)，形成

白色

白色

（填“藍色”或“白色”）菌落的為導(dǎo)入重組質(zhì)粒的受體細胞。