IL-6(白細(xì)胞介素6)在體內(nèi)過量表達(dá)會(huì)引發(fā)多種免疫性疾病。在免疫療法中,利用人源IL-6抗體結(jié)合過量的IL-6進(jìn)行治療比使用鼠源IL-6單抗效果更好、風(fēng)險(xiǎn)更小??蒲腥藛T利用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法將人源IL-6抗體基因轉(zhuǎn)入某種植物中并成功表達(dá)?;卮鹣铝袉栴}:
(1)將IL-6注射到小鼠體內(nèi),取小鼠脾臟細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞融合,篩選出 能產(chǎn)生特異性IL-6抗體的雜交瘤細(xì)胞能產(chǎn)生特異性IL-6抗體的雜交瘤細(xì)胞進(jìn)行擴(kuò)大培養(yǎng),可規(guī)?;a(chǎn)鼠源IL-6抗體。與人源抗體相比,前者在實(shí)際應(yīng)用中除了可能因免疫排斥導(dǎo)致效果較差外,還可能具有的潛在風(fēng)險(xiǎn)是 引起過敏反應(yīng)引起過敏反應(yīng)。
(2)用限制性內(nèi)切核酸酶和DNA連接酶處理人源IL-6抗體基因與 Ti質(zhì)粒Ti質(zhì)粒,構(gòu)建表達(dá)載體,再將其與經(jīng) Ca2+Ca2+處理的農(nóng)桿菌共培養(yǎng)。培養(yǎng)農(nóng)桿菌的培養(yǎng)基成分通常包括蛋白胨、酵母浸出液、無機(jī)鹽和水,其中蛋白胨可以為農(nóng)桿菌提供哪些營養(yǎng)成分 ABDABD。
A.碳源
B.氮源
C.抗生素
D.維生素
(3)利用篩選后的農(nóng)桿菌感染植物愈傷組織后,將愈傷組織置于含有抗生素的培養(yǎng)基中繼續(xù)培養(yǎng),抗生素的作用是篩選轉(zhuǎn)化成功的愈傷組織細(xì)胞及 殺滅農(nóng)桿菌殺滅農(nóng)桿菌。在適宜配比的激素誘導(dǎo)下,細(xì)胞不斷分裂,并經(jīng) 再分化再分化過程形成胚狀體,繼續(xù)發(fā)育形成試管苗。試管苗移栽到土壤前,通常需在經(jīng) 高壓蒸汽滅菌高壓蒸汽滅菌的珍珠巖或蛭石中進(jìn)行煉苗。
(4)利用凝膠電泳和分子雜交技術(shù)檢測(cè)人源IL-6抗體基因是否成功表達(dá)。完善以下實(shí)驗(yàn)思路:
①將幼苗葉片液氮冷凍并 研磨研磨,用苯酚法提取葉片總蛋白,制成樣品。
②將 凝膠凝膠置于緩沖溶液中,再向加樣孔中加入蛋白樣品,由于人源IL-6抗體是酸性蛋白質(zhì),所以加樣孔應(yīng)朝向 負(fù)負(fù)極。
③電泳分離結(jié)束,轉(zhuǎn)移到PVDF膜上,利用 抗原—抗體分子雜交抗原—抗體分子雜交技術(shù)進(jìn)行檢測(cè)。
(5)在利用植物體作為生物反應(yīng)器進(jìn)行人源IL-6抗體規(guī)?;a(chǎn)前,除對(duì)表達(dá)劑量進(jìn)行檢測(cè)外,還需要對(duì)抗體的 活性活性進(jìn)行檢測(cè)。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn),轉(zhuǎn)基因植物葉片中人源IL-6抗體表達(dá)水平較低,這與植物葉肉細(xì)胞中基因X的表達(dá)有關(guān)。可采取基因敲除技術(shù)將neo基因定向插入到基因X中,使其表達(dá)失活。在使用PCR檢測(cè)基因X是否被敲除時(shí),至少一側(cè)的引物需要根據(jù) neo基因neo基因的堿基序列設(shè)計(jì)。
【答案】能產(chǎn)生特異性IL-6抗體的雜交瘤細(xì)胞;引起過敏反應(yīng);Ti質(zhì)粒;Ca2+;ABD;殺滅農(nóng)桿菌;再分化;高壓蒸汽滅菌;研磨;凝膠;負(fù);抗原—抗體分子雜交;活性;neo基因
【解答】
【點(diǎn)評(píng)】
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發(fā)布:2024/6/27 10:35:59組卷:30引用:2難度:0.7
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1.CD47是一種跨膜糖蛋白,它可與巨噬細(xì)胞表面的信號(hào)調(diào)節(jié)蛋白結(jié)合,從而抑制巨噬細(xì)胞的吞噬作用。肺癌、結(jié)腸癌等多種腫瘤細(xì)胞表面的CD47含量比正常細(xì)胞高1.6~5倍,導(dǎo)致吞噬細(xì)胞對(duì)腫瘤細(xì)胞的清除效果減弱??茖W(xué)家推測(cè),抗CD47的單克隆抗體可以解除CD47對(duì)巨噬細(xì)胞的抑制作用,為此他們按照如圖流程進(jìn)行了實(shí)驗(yàn)。下列敘述正確的是( )
發(fā)布:2024/12/31 1:30:1組卷:7引用:3難度:0.6 -
2.雙特異性抗體是指一個(gè)抗體分子可以與兩個(gè)不同抗原或同一抗原的兩個(gè)不同抗原表位相結(jié)合,目前最常利用雜交瘤雜交法來制備。長(zhǎng)春花是原產(chǎn)于非洲東海岸的野生花卉,其所含的長(zhǎng)春堿具有良好的抗腫瘤作用。圖1是某雙特異性抗體作用圖。圖2是科研人員通過雜交—雜交瘤細(xì)胞技術(shù)(免疫的B淋巴細(xì)胞和雜交瘤細(xì)胞雜交技術(shù))生產(chǎn)能同時(shí)識(shí)別癌胚抗原和長(zhǎng)春堿的雙特異性單克隆抗體的部分過程。請(qǐng)分析回答下列問題:
(1)與植物體細(xì)胞雜交相比,圖2中過程②特有的誘導(dǎo)融合的方法是
(2)對(duì)③篩選出的雜交瘤細(xì)胞,還需進(jìn)行
(3)圖2中①步驟注射癌胚抗原的目的是
(4)與直接使用長(zhǎng)春堿相比,將長(zhǎng)春堿與雙特異性單克隆抗體結(jié)合后給藥,對(duì)人體的副作用更小,原因是發(fā)布:2024/12/31 1:30:1組卷:21引用:4難度:0.5 -
3.使用高效的細(xì)胞毒素藥物進(jìn)行化療可以有效殺傷腫瘤細(xì)胞但細(xì)胞毒素沒有特異性,在殺傷腫瘤細(xì)胞的同時(shí)還會(huì)對(duì)健康細(xì)胞造成傷害。這限制了它在臨床上的應(yīng)用??贵w一藥物偶聯(lián)物(ADC)通過將細(xì)胞毒素與能特異性識(shí)別腫瘤抗原的單克隆抗體結(jié)合,實(shí)現(xiàn)了對(duì)腫瘤細(xì)胞的選擇性殺傷ADC通常由抗體、接頭和藥物(如細(xì)胞毒素)三部分組成,它的作用機(jī)制如圖所示。下列敘述正確的是( ?。?br />
發(fā)布:2024/12/31 3:30:1組卷:18引用:2難度:0.7
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