絞股藍(lán)細(xì)胞中含有抗煙草花葉病毒（TMV）基因，能合成抗TMV蛋白，使絞股藍(lán)葉片能抗TMV感染。科研人員利用轉(zhuǎn)基因技術(shù)將絞股藍(lán)細(xì)胞中的抗TMV基因轉(zhuǎn)入煙草細(xì)胞，培育出了抗TMV的煙草，主要流程如圖所示。請(qǐng)分析圖并回答問(wèn)題：

（1）從絞股藍(lán)細(xì)胞中提取抗TMV基因轉(zhuǎn)錄的RNA，合成目的基因。過(guò)程①需要的酶是

逆轉(zhuǎn)錄酶

逆轉(zhuǎn)錄酶

。利用PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因時(shí)，反應(yīng)體系中除有緩沖液、原料（dNTP）、目的基因外，還應(yīng)含有

引物和Taq酶

引物和Taq酶

。
（2）由①獲得的目的基因在構(gòu)建表達(dá)載體時(shí)，應(yīng)在目的基因的首端和尾端分別添加

啟動(dòng)子和終止子

啟動(dòng)子和終止子

，同時(shí)為了與表達(dá)載體連接，通常在兩端插入不同的限制性酶切位點(diǎn)，主要原因是

使目的基因能定向插入表達(dá)載體，避免自身環(huán)化

使目的基因能定向插入表達(dá)載體，避免自身環(huán)化

。由圖可知，在過(guò)程③中應(yīng)將目的基因插入Ti質(zhì)粒的T-DNA上，同時(shí)該片段中還應(yīng)有

卡那霉素

卡那霉素

抗性基因。
（3）將含抗TMV基因的煙草細(xì)胞經(jīng)⑤獲得再生植株的生物技術(shù)是

植物組織培養(yǎng)

植物組織培養(yǎng)

。這項(xiàng)技術(shù)不僅能實(shí)現(xiàn)快速繁殖作物還能保持優(yōu)良品種的

遺傳特性

遺傳特性

。
（4）過(guò)程⑥在個(gè)體生物學(xué)水平鑒定，需要做

TMV接種

TMV接種

實(shí)驗(yàn)，可檢測(cè)植株是否具有抗性以及抗性的強(qiáng)度。