農(nóng)桿菌Ti質(zhì)粒上的T-DNA（序列已知）可以轉(zhuǎn)移并隨機(jī)插入被侵染植物的染色體DNA中。研究者將圖1中被侵染植物的DNA片段連接成環(huán)，并以此環(huán)為模板，利用PCR技術(shù)擴(kuò)增出T-DNA插入位置兩側(cè)的未知序列，進(jìn)一步分析可確定T-DNA插入的具體位置。T-DNA的序列如圖2所示，虛線處省略了部分核苷酸序列。已知SalⅠ酶的識(shí)別序列為5'G↓TCGAC3'。
（1）PCR技術(shù)擴(kuò)增時(shí)起關(guān)鍵作用的酶是 Taq酶（或耐高溫的DNA聚合酶）Taq酶（或耐高溫的DNA聚合酶），其作用是 將游離的脫氧核苷酸連到引物的3'端將游離的脫氧核苷酸連到引物的3'端。
（2）擴(kuò)增出T-DNA插入位置兩側(cè)的未知序列時(shí)，需要先根據(jù) T-DNA基因兩端已知的堿基序列T-DNA基因兩端已知的堿基序列設(shè)計(jì)兩種特異性引物序列，利用圖中的引物 ①④①④組合可擴(kuò)增出T-DNA兩側(cè)的未知序列。
（3）若只使用一種引物，通過(guò)PCR技術(shù)制備與T-DNA的b鏈相同的單鏈作為某些檢測(cè)的探針，則所選擇引物由5'→3'的前5個(gè)堿基序列為 5′-CTGTC-3′5′-CTGTC-3′。
（4）對(duì)PCR產(chǎn)物測(cè)序，經(jīng)分析得到了圖1中的未知序列。下列DNA單鏈序列中（虛線處省略了部分核苷酸序列），可能正確的是 AA。
A．5'-TCGACCACG_____ATGTCGA-3'
B．5-AATTCCATG_____CTGAATT-3'
C．5'-GCAATGCGT_____TCGGGAA-3'
D．5'-TTGATACGC_____CGAGTAC-3'
（5）PCR技術(shù)擴(kuò)增出T-DNA插入位置兩側(cè)的未知序列后，擴(kuò)增產(chǎn)物可用 瓊脂糖凝膠電泳瓊脂糖凝膠電泳技術(shù)進(jìn)行鑒定。
【考點(diǎn)】DNA片段的擴(kuò)增與電泳鑒定．
【答案】Taq酶（或耐高溫的DNA聚合酶）；將游離的脫氧核苷酸連到引物的3'端；T-DNA基因兩端已知的堿基序列；①④；5′-CTGTC-3′；A；瓊脂糖凝膠電泳
【解答】
【點(diǎn)評(píng)】
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發(fā)布：2024/6/27 10:35:59組卷：10引用：1難度：0.5
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1．數(shù)字PCR技術(shù)是一種核酸分子絕對(duì)定量技術(shù)，其原理如圖所示。下列有關(guān)敘述正確的是（ ?。?img alt src="http://img.jyeoo.net/quiz/images/202204/49/6d911ea3.png" style="vertical-align:middle" />
發(fā)布：2024/12/30 23:30:2組卷：6引用：2難度：0.6 -
2．科學(xué)家為了提高光合作用過(guò)程中Rubiaco酶對(duì)CO2的親和力，利用PCR定點(diǎn)突變技術(shù)改造Rubisco酶基因，從而顯著提高了植物的光合作用速率。請(qǐng)回答下列問(wèn)題：
（1）PCR定點(diǎn)突變技術(shù)屬于（填“基因工程”或“蛋白質(zhì)工程”）。可利用定點(diǎn)突變的DNA構(gòu)建基因表達(dá)載體，常用將基因表達(dá)載體導(dǎo)入植物細(xì)胞，還需用到植物細(xì)胞工程中的技術(shù)，才能最終獲得轉(zhuǎn)基因植物。
（2）PCR過(guò)程所依據(jù)的原理是。利用PCR技術(shù)擴(kuò)增，若將一個(gè)目的基因復(fù)制10次，則需要在緩沖液中至少加入個(gè)引物。
（3）目的基因進(jìn)入受體細(xì)胞內(nèi)，并在受體細(xì)胞內(nèi)維持穩(wěn)定和表達(dá)的過(guò)程稱為?？蒲腥藛T通過(guò)實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)培育的該轉(zhuǎn)基因植株的光合作用速率并未明顯增大，可能的原因是。
（4）另有一些科學(xué)家利用生物技術(shù)將人的生長(zhǎng)激素基因?qū)胄∈笫芫训募?xì)胞核中，經(jīng)培育獲得一種轉(zhuǎn)基因小鼠，其膀胱上皮細(xì)胞可以合成人的生長(zhǎng)激素并分泌到尿液中。有關(guān)敘述錯(cuò)誤的是。
A．選擇受精卵作為外源基因的受體細(xì)胞是因?yàn)檫@種細(xì)胞的全能性最容易表達(dá)
B．采用DNA分子雜交技術(shù)可檢測(cè)外源基因在小鼠細(xì)胞內(nèi)是否成功表達(dá)
C．人的生長(zhǎng)激素基因能在小鼠細(xì)胞表達(dá)，說(shuō)明遺傳密碼在不同種生物中可以通用
D．將轉(zhuǎn)基因小鼠體細(xì)胞進(jìn)行核移植（克隆），可以獲得多個(gè)具有外源基因的后代發(fā)布：2025/1/16 8:0:1組卷：14引用：2難度：0.6 -
3．下列關(guān)于DNA片段擴(kuò)增及其鑒定的說(shuō)法錯(cuò)誤的是（ ?。?/h2>
發(fā)布：2024/12/30 23:30:2組卷：3引用：3難度：0.7
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