“實(shí)時(shí)熒光定量qPCR”是新冠疫情防控的一把利刃，通常在1～2h內(nèi)即可得到檢測結(jié)果。TaqMan探針是實(shí)時(shí)熒光定量RT-PCR技術(shù)中一種常用探針（如圖1），其5′端連接熒光基團(tuán)（R），3′端連接淬滅劑（Q）。當(dāng)探針完整時(shí)，R發(fā)出的熒光信號被Q吸收而不發(fā)熒光。在PCR擴(kuò)增過程中，當(dāng)TaqDNA聚合酶遇到探針時(shí)會使探針?biāo)舛尫懦鲇坞x的R和Q，R發(fā)出的熒光信號被相應(yīng)儀器檢測到，熒光信號的累積與PCR產(chǎn)物數(shù)量完全同步（如圖2）。請據(jù)圖回答：
（1）結(jié)合圖1和圖2分析，“熒光RT-PCR技術(shù)”所用的試劑盒中通常都應(yīng)該含有 逆（反）轉(zhuǎn)錄逆（反）轉(zhuǎn)錄酶、TaqTaq酶、TaqMan探針、引物、dNTP、Mg2+、緩沖劑等。這種分子層面的熒光RT-PCR檢測具有特異性和靈敏性都很高的特點(diǎn)，主要與試劑盒中的 引物引物、TaqMan探針TaqMan探針有關(guān)。
（2）根據(jù)TaqMan探針功能分析，探針中堿基序列的設(shè)計(jì)應(yīng)主要依據(jù) 新冠病毒RNA內(nèi)部的一段序列（新冠病毒RNA逆轉(zhuǎn)錄形成的DNA的部分序列）新冠病毒RNA內(nèi)部的一段序列（新冠病毒RNA逆轉(zhuǎn)錄形成的DNA的部分序列）。新冠病毒（2019-nCoV）是冠狀病毒大家庭中的新的一員，其堿基序列與引起SARS的冠狀病毒堿基序列有79.5%的相似性，與流感病毒堿基相似度也較高，因此在設(shè)計(jì)TaqMan探針時(shí)應(yīng)篩選出2019-nCoV特有序列，以避免 假陽性假陽性（填“假陰性”或“假陽性”）的出現(xiàn)。
（3）根據(jù)圖1和圖2，Taq DNA聚合酶除了能催化DNA子鏈的延伸，還能 催化RNA（TaqMan探針）的水解催化RNA（TaqMan探針）的水解。
（4）IgM和IgG均屬于免疫球蛋白家族，是機(jī)體在抗原物質(zhì)刺激下由漿細(xì)胞產(chǎn)生的抗體。IgM/IgG檢測試劑盒的原理是 抗原抗體特異性結(jié)合抗原抗體特異性結(jié)合，通過檢測人體內(nèi)相應(yīng)抗體間接證明是否感染。被病毒感染后，機(jī)體會產(chǎn)生一系列的變化來抵御這種入侵，其中IgM和IgG的含量會發(fā)生如圖3所示變化。
通過對COVID-19患者研究發(fā)現(xiàn)，病毒侵入人體后，大約需要5～7天產(chǎn)生IgM抗體，IgG抗體在感染后10～15天時(shí)產(chǎn)生。通過檢測外周血中IgM和IgG，不僅可以鑒別是否感染，還可以辨別檢測者是近期感染或者是既往感染。當(dāng)核酸檢測結(jié)果為陽性，IgM（+）IgG（-）時(shí)，可判斷檢測者為 近期感染近期感染；已治愈的患者檢測結(jié)果應(yīng)為 核酸檢測結(jié)果為陰性，IgM （-） IgG （+）核酸檢測結(jié)果為陰性，IgM （-） IgG （+）。
【考點(diǎn)】DNA片段的擴(kuò)增與電泳鑒定．
【答案】逆（反）轉(zhuǎn)錄；Taq；引物；TaqMan探針；新冠病毒RNA內(nèi)部的一段序列（新冠病毒RNA逆轉(zhuǎn)錄形成的DNA的部分序列）；假陽性；催化RNA（TaqMan探針）的水解；抗原抗體特異性結(jié)合；近期感染；核酸檢測結(jié)果為陰性，IgM （-） IgG （+）
【解答】
【點(diǎn)評】
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發(fā)布：2024/6/27 10:35:59組卷：23引用：1難度：0.6
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1．數(shù)字PCR技術(shù)是一種核酸分子絕對定量技術(shù)，其原理如圖所示。下列有關(guān)敘述正確的是（ ?。?img alt="菁優(yōu)網(wǎng)" src="https://img.jyeoo.net/quiz/images/202204/49/6d911ea3.png" style="vertical-align:middle" />
發(fā)布：2024/12/30 23:30:2組卷：6引用：2難度：0.6 -
2．PCR技術(shù)不僅可以擴(kuò)增目的基因，還可用于定點(diǎn)誘變目的基因等。大引物PCR就是一種定點(diǎn)突變技術(shù)。大引物PCR需要用到引物進(jìn)行兩次PCR，其操作步驟為：
①根據(jù)目的基因序列設(shè)計(jì)引物，得到兩個(gè)常規(guī)引物，分別為常規(guī)上游引物和常規(guī)下游引物；
②根據(jù)突變堿基所處序列位置設(shè)計(jì)突變上游引物，突變位點(diǎn)位于突變引物序列的中間位置
③由突變上游引物與常規(guī)下游引物進(jìn)行第一次PCR反應(yīng)得到下游大引物；
④用得到的下游大引物中和另一個(gè)常規(guī)上游引物進(jìn)行第二次PCR擴(kuò)增，得到突變目的基因序列?；卮鹣铝袉栴}：
（1）PCR擴(kuò)增的第一步是使雙鏈模板DNA變性。DNA中G+C的含量與變性要求的溫度有關(guān)，DNA中G+C的含量越多，要求的變性溫度越高。其原因是。該P(yáng)CR擴(kuò)增技術(shù)所需的基本條件是種引物、原料、模板、。
（2）在第一次PCR反應(yīng)中，形成圖示雙鏈DNA至少要經(jīng)過次復(fù)制。第一次PCR的產(chǎn)物DNA的條鏈作為第二次PCR所用的引物。與X射線誘變相比，該突變技術(shù)的優(yōu)點(diǎn)是。
（3）如果要利用微生物進(jìn)一步克隆PCR定點(diǎn)誘變產(chǎn)物，其步驟包括：、、微生物的篩選和培養(yǎng)、從菌群中獲取更多目的基因。將獲取目的基因和質(zhì)粒進(jìn)行連接后，需先用處理農(nóng)桿菌以便將基因表達(dá)載體導(dǎo)入馬鈴薯細(xì)胞，將馬鈴薯細(xì)胞培養(yǎng)成幼苗時(shí)經(jīng)過的兩個(gè)過程是。檢測目的基因是否在馬鈴薯細(xì)胞中轉(zhuǎn)錄出了mRNA，所采用的方法是。發(fā)布：2024/12/30 23:0:2組卷：32引用：3難度：0.6 -
3．下列關(guān)于DNA片段擴(kuò)增及其鑒定的說法錯(cuò)誤的是（ ）
發(fā)布：2024/12/30 23:30:2組卷：3引用：3難度：0.7
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