哺乳動物細胞產(chǎn)生的酶M在工業(yè)上極具應用價值，現(xiàn)擬利用大腸桿菌大規(guī)模生產(chǎn)該酶。下圖1為根據(jù)哺乳動物細胞中酶M基因合成的cDNA序列（加在cDNA兩側的限制酶識別序列不影響基因的正確表達），圖2為質粒pXY6的結構示意圖，其中VanR為萬古霉素抗性基因，GFP基因編碼綠色熒光蛋白，大腸桿菌中不具有這兩種基因。限制酶NsiⅠ、PstⅠ、SbfⅠ、BclⅠ和BspEⅠ識別序列及切割位點分別為ATGCA↓T、CTGCA↓G、CCTGCA↓GG、T↓GATCA和T↓CCGGA。請回答下列問題：
（1）將哺乳動物的酶M基因直接導入大腸桿菌中，合成的蛋白質的氨基酸序列較酶M長，可能的原因是 酶M基因中含有內含子序列，在真核細胞轉錄后會切除，而大腸桿菌中不會被切除酶M基因中含有內含子序列，在真核細胞轉錄后會切除，而大腸桿菌中不會被切除。因此，基因工程中通常采用目的基因的cDNA形式；與細胞中的基因相比，cDNA不具有 啟動子和終止子（或非編碼區(qū)）啟動子和終止子（或非編碼區(qū)）等結構，便于在原核細胞中表達出與真核細胞基因相同的蛋白質。
（2）基因工程的核心步驟為 基因表達載體的構建基因表達載體的構建；圖示cDNA與質粒的連接，需要先選擇 NsiⅠ和PstⅠNsiⅠ和PstⅠ酶切cDNA和 SbfⅠSbfⅠ酶切pXY6，酶切產(chǎn)物再通過 DNA連接酶DNA連接酶連接。
（3）將重組質粒導入提高大腸桿菌，常用 Ca2+Ca2+處理，使其處于感受態(tài)。在選擇符合生產(chǎn)要求的重組質粒過程中，在含萬古霉素的培養(yǎng)基中能生長的為導入 重組質粒和pX6重組質粒和pX6質粒的大腸桿菌。
（4）若用限制酶BspEⅠ、PstⅠ和BclⅠ完全酶切符合生產(chǎn)要求的重組質粒，可得到 55種DNA片段。
【考點】基因工程的操作過程綜合．
【答案】酶M基因中含有內含子序列，在真核細胞轉錄后會切除，而大腸桿菌中不會被切除；啟動子和終止子（或非編碼區(qū)）；基因表達載體的構建；NsiⅠ和PstⅠ；SbfⅠ；DNA連接酶；Ca2+；重組質粒和pX6；5
【解答】
【點評】
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發(fā)布：2024/6/27 10:35:59組卷：3引用：1難度：0.6
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3．幾丁質是許多真菌細胞壁的重要成分，幾丁質酶可催化幾丁質水解。通過基因工程將幾丁質酶基因轉入植物體內，可增強其抗真菌病的能力。回答下列問題：
（1）基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以從基因文庫中獲得?；蛭膸彀?和。
（2）生物體細胞內的DNA復制開始時，解開DNA雙鏈的酶是。在體外利用PCR技術擴增目的基因時，使反應體系中的模板DNA解鏈為單鏈的條件是。上述兩個解鏈過程的共同點是破壞了DNA雙鏈分子中的。
（3）DNA連接酶是將兩個DNA片段連接起來的酶，常見的有和，其中既能連接黏性末端又能連接平末端的是。當幾丁質酶基因和質粒載體連接時，DNA連接酶催化形成的化學鍵是。
（4）提取RNA時，提取液中需添加RNA酶抑制劑，其目的是。
（5）若獲得的轉基因植株（幾丁質酶基因已經(jīng)整合到植物的基因組中）抗真菌病的能力沒有提高，根據(jù)中心法則分析，其可能的原因是。發(fā)布：2025/1/5 8:0:1組卷：2引用：2難度：0.6