PCR定點突變技術(shù)是最常用的基因突變技術(shù)，通過定點誘變可以在體外改造DNA分子。重疊延伸PCR是發(fā)展最早的PCR定點突變技術(shù)，操作過程如圖1。可通過測序檢驗定點突變是否成功?，F(xiàn)欲將改造后的基因構(gòu)建重組質(zhì)粒導(dǎo)入大腸桿菌，質(zhì)粒結(jié)構(gòu)如圖2。回答下列問題：
（1）圖1所示重疊延伸PCR中，第1對引物是 突變引物FP2和通用引物RP2突變引物FP2和通用引物RP2；在第1對引物組成的反應(yīng)系統(tǒng)和第2對引物組成的反應(yīng)系統(tǒng)中各進(jìn)行一次復(fù)制，共產(chǎn)生 33種DNA分子；此過程不能將兩對引物共置于同一反應(yīng)系統(tǒng)中，原因是 突變引物FP2和突變引物RP1可以互補配對，導(dǎo)致引物失效突變引物FP2和突變引物RP1可以互補配對，導(dǎo)致引物失效。
（2）圖1所示DNA分子不能延伸，原因是 DNA單鏈延伸的方向必須是5’到3’DNA單鏈延伸的方向必須是5’到3’。
（3）分析圖1和圖2，要將突變的基因定向插入質(zhì)粒并構(gòu)建表達(dá)載體，應(yīng)如何設(shè)計通用引物FP1和通用引物RP2？應(yīng)保證突變基因右側(cè)應(yīng)是CTAG應(yīng)保證突變基因右側(cè)應(yīng)是CTAG。
（4）為篩選出含有目的基因的大腸桿菌，通常采用影印法（使用無菌的絨氈布壓在培養(yǎng)基A的菌落上，帶出少許菌種，平移并壓在培養(yǎng)基B上，結(jié)果如圖3）。培養(yǎng)基A中應(yīng)添加 氨芐青霉素氨芐青霉素，培養(yǎng)基B中應(yīng)添加 四環(huán)素四環(huán)素，含有重組質(zhì)粒的菌落是 4、64、6（填寫數(shù)字），原因是 用兩種限制酶對質(zhì)粒進(jìn)行切割時，會破壞四環(huán)素抗性基因，但不會破壞氨芐青霉素抗性基因，因此導(dǎo)入重組質(zhì)粒的農(nóng)桿菌能在含有氨芐青霉素的培養(yǎng)基上能生存，但不能在含有四環(huán)素培養(yǎng)基上生存用兩種限制酶對質(zhì)粒進(jìn)行切割時，會破壞四環(huán)素抗性基因，但不會破壞氨芐青霉素抗性基因，因此導(dǎo)入重組質(zhì)粒的農(nóng)桿菌能在含有氨芐青霉素的培養(yǎng)基上能生存，但不能在含有四環(huán)素培養(yǎng)基上生存。
【答案】突變引物FP2和通用引物RP2；3；突變引物FP2和突變引物RP1可以互補配對，導(dǎo)致引物失效；DNA單鏈延伸的方向必須是5’到3’；應(yīng)保證突變基因右側(cè)應(yīng)是CTAG；氨芐青霉素；四環(huán)素；4、6；用兩種限制酶對質(zhì)粒進(jìn)行切割時，會破壞四環(huán)素抗性基因，但不會破壞氨芐青霉素抗性基因，因此導(dǎo)入重組質(zhì)粒的農(nóng)桿菌能在含有氨芐青霉素的培養(yǎng)基上能生存，但不能在含有四環(huán)素培養(yǎng)基上生存
【解答】
【點評】
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發(fā)布：2024/6/27 10:35:59組卷：41引用：2難度：0.5
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1．科學(xué)家為了提高光合作用過程中Rubiaco酶對CO2的親和力，利用PCR定點突變技術(shù)改造Rubisco酶基因，從而顯著提高了植物的光合作用速率。請回答下列問題：
（1）PCR定點突變技術(shù)屬于（填“基因工程”或“蛋白質(zhì)工程”）。可利用定點突變的DNA構(gòu)建基因表達(dá)載體，常用將基因表達(dá)載體導(dǎo)入植物細(xì)胞，還需用到植物細(xì)胞工程中的技術(shù)，才能最終獲得轉(zhuǎn)基因植物。
（2）PCR過程所依據(jù)的原理是。利用PCR技術(shù)擴(kuò)增，若將一個目的基因復(fù)制10次，則需要在緩沖液中至少加入個引物。
（3）目的基因進(jìn)入受體細(xì)胞內(nèi)，并在受體細(xì)胞內(nèi)維持穩(wěn)定和表達(dá)的過程稱為。科研人員通過實驗研究發(fā)現(xiàn)培育的該轉(zhuǎn)基因植株的光合作用速率并未明顯增大，可能的原因是。
（4）另有一些科學(xué)家利用生物技術(shù)將人的生長激素基因?qū)胄∈笫芫训募?xì)胞核中，經(jīng)培育獲得一種轉(zhuǎn)基因小鼠，其膀胱上皮細(xì)胞可以合成人的生長激素并分泌到尿液中。有關(guān)敘述錯誤的是。
A．選擇受精卵作為外源基因的受體細(xì)胞是因為這種細(xì)胞的全能性最容易表達(dá)
B．采用DNA分子雜交技術(shù)可檢測外源基因在小鼠細(xì)胞內(nèi)是否成功表達(dá)
C．人的生長激素基因能在小鼠細(xì)胞表達(dá)，說明遺傳密碼在不同種生物中可以通用
D．將轉(zhuǎn)基因小鼠體細(xì)胞進(jìn)行核移植（克?。?，可以獲得多個具有外源基因的后代發(fā)布：2025/1/16 8:0:1組卷：14引用：2難度：0.6 -
2．數(shù)字PCR技術(shù)是一種核酸分子絕對定量技術(shù)，其原理如圖所示。下列有關(guān)敘述正確的是（ ）
發(fā)布：2024/12/30 23:30:2組卷：6引用：2難度：0.6 -
3．下列關(guān)于DNA片段擴(kuò)增及其鑒定的說法錯誤的是（ ）
發(fā)布：2024/12/30 23:30:2組卷：3引用：3難度：0.7
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