甜玉米與普通玉米相比，甜玉米中可溶性糖向淀粉的轉(zhuǎn)化較慢導(dǎo)致可溶性糖含量高，汁多質(zhì)脆，富含多種維生素。為了使甜玉米更富有生產(chǎn)應(yīng)用價(jià)值，科研人員通過(guò)轉(zhuǎn)基因技術(shù)培育出了超量表達(dá)P蛋白轉(zhuǎn)基因甜玉米。在超量表達(dá)P基因載體的構(gòu)建中，所用DNA片段和Ti質(zhì)粒的酶切位點(diǎn)如圖1所示。回答下列問(wèn)題：

（1）強(qiáng)啟動(dòng)子是一段有特殊結(jié)構(gòu)的DNA片段，能被識(shí)別并結(jié)合，驅(qū)動(dòng)基因的持續(xù)轉(zhuǎn)錄。為使P基因在玉米植株中超量表達(dá)，應(yīng)優(yōu)先選用

BamHⅠ和SacⅠ

BamHⅠ和SacⅠ

酶組合，將DNA片段和Ti質(zhì)粒切開(kāi)后構(gòu)建重組表達(dá)載體。
（2）外植體經(jīng)脫分化形成的玉米放入農(nóng)桿菌液浸泡后進(jìn)行植物組織培養(yǎng)，培養(yǎng)基中需加入

潮霉素

潮霉素

進(jìn)行篩選，最終獲得多個(gè)玉米株系a₁、a₂、a₃、a₄。通過(guò)對(duì)a₁、a₂、a₃、a₄四株甜玉米株系的蛋白質(zhì)表達(dá)量進(jìn)行測(cè)定結(jié)果如圖2，導(dǎo)致a₄株系的表達(dá)量低于野生型的原因是

a₄株系玉米中可能未導(dǎo)入重組質(zhì)?；?qū)肽康幕蛭幢磉_(dá)

a₄株系玉米中可能未導(dǎo)入重組質(zhì)粒或?qū)肽康幕蛭幢磉_(dá)

。
（3）真核基因的編碼區(qū)含有內(nèi)含子和外顯子，圖3為淀粉酶合成基因片段，其轉(zhuǎn)錄后形成的前體RNA需通過(guò)剪接（切去內(nèi)含子對(duì)應(yīng)序列）和加工后方能用于翻譯。為了進(jìn)一步提高甜玉米中淀粉的含量，科研人員提出通過(guò)降低淀粉酶合成有關(guān)基因的表達(dá)實(shí)現(xiàn)生產(chǎn)目標(biāo)。研究人員研究發(fā)現(xiàn)嗎啉反義寡核苷酸是一種RNA剪接抑制劑，將其注入植物細(xì)胞內(nèi)會(huì)使基因表達(dá)受阻，科研人員將嗎啉反義寡核苷酸導(dǎo)入玉米的受精卵中起到明顯效果。針對(duì)它的具體作用，科研人員提出以下假說(shuō)：
假說(shuō)1：導(dǎo)致RNA前體上內(nèi)含子1的對(duì)應(yīng)序列不能被剪。
假說(shuō)2：導(dǎo)致RNA前體上內(nèi)含子1和外顯子2的對(duì)應(yīng)序列同時(shí)被剪切。
①為了驗(yàn)證上述假說(shuō)，分別從受精卵發(fā)育后3天的實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組胚細(xì)胞中提取，逆轉(zhuǎn)錄形成cDNA。若假說(shuō)1成立，使用如圖所示引物2和引物4進(jìn)行PCR后電泳的結(jié)果為

AD

AD

（填字母）。
A．實(shí)驗(yàn)組有目的條帶
B．實(shí)驗(yàn)組無(wú)目的條帶
C．對(duì)照組有目的條帶
D．對(duì)照組無(wú)目的條帶
②若要證明假說(shuō)2成立，需要選擇如圖

3和4

3和4

所示引物進(jìn)行PCR。
③某次實(shí)驗(yàn)結(jié)果電泳發(fā)現(xiàn)：實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組都沒(méi)有任何條帶，從PCR操作過(guò)程角度解釋可能的原因是

退火溫度太高、引物自連或互連

退火溫度太高、引物自連或互連

（至少寫(xiě)出兩點(diǎn)）。