科研人員克隆了豬白細胞抗原基因（SLA-2基因），構建了該基因的真核表達載體，進行了豬腎上皮細胞表達研究。實驗的主要流程如下，SLA-2基因長度為1100bp,質(zhì)粒B的總長度為4445bp,其限制酶切點后的數(shù)字表示距復制原點的距離?？赡苡玫降南拗泼缸R別序列和切割位點如下表所示。
| 限制酶 | BclⅠ | NotⅠ | XbaⅠ | Sau3AⅠ |
| 識別序列及切割位點 | T↓GATCA | GC↓GGCCGC | T↓CTAGA | ↓GATC |
（1）過程①中，PCR擴增SLA-2的原理是
DNA（半保留）復制
DNA（半保留）復制
，下列4種引物中應選擇的是 引物a和引物b
引物a和引物b
。引物a：5’-GCTCTAGAATGCGGGTCAGGGGCCCTCAAGCCATCCTC-3’
引物b：5’-GTTGCGGCCGCTCACACTCTAGGATCCTTGGTAAGGGACAC-3’
引物c：5’-GCGATCATGCGGGTCAGGGGCCCTCAAGCCATCCTC-3’
引物d：5’-GTTTGATCACTCACACTCTAGGATCCTTGGTAAGGGACAC-3’
（2）過程②將重組質(zhì)粒導入大腸桿菌的目的是
擴增重組質(zhì)粒
擴增重組質(zhì)粒
，該過程需要用 Ca2+
Ca2+
處理大腸桿菌，使其成為感受態(tài)細胞。然后將大腸桿菌涂布在含有 氨芐青霉素
氨芐青霉素
（抗生素）的培養(yǎng)基上培養(yǎng)。（3）若用限制酶Sau3AⅠ和XbaⅠ完全切割質(zhì)粒B和質(zhì)粒C后電泳，請在圖3中畫出預測的電泳結果
（4）科研中常用嘌呤霉素對真核細胞進行篩選，嘌呤霉素對細胞的毒性實驗結果如圖，根據(jù)實驗結果最佳的嘌霉素篩選濃度為
80μg/mL
80μg/mL
，原因是 既讓沒有抗性的細胞死亡，又不會殺死有抗性的細胞
既讓沒有抗性的細胞死亡，又不會殺死有抗性的細胞
。（5）篩選產(chǎn)SLA-2抗原肽的豬腎上皮細胞的方法是
用抗SLA-2抗原肽的抗體進行抗原—抗體雜交法篩選
用抗SLA-2抗原肽的抗體進行抗原—抗體雜交法篩選
。【考點】基因工程的操作過程綜合；DNA片段的擴增與電泳鑒定．
【答案】DNA（半保留）復制；引物a和引物b；擴增重組質(zhì)粒；Ca2+；氨芐青霉素；；80μg/mL；既讓沒有抗性的細胞死亡，又不會殺死有抗性的細胞；用抗SLA-2抗原肽的抗體進行抗原—抗體雜交法篩選
；80μg/mL；既讓沒有抗性的細胞死亡，又不會殺死有抗性的細胞；用抗SLA-2抗原肽的抗體進行抗原—抗體雜交法篩選【解答】
【點評】
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發(fā)布：2024/6/6 8:0:9組卷：10引用：2難度：0.5
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1．下列有關基因工程技術和蛋白質(zhì)工程技術敘述正確的是（ ?。?/h2>
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3．幾丁質(zhì)是許多真菌細胞壁的重要成分，幾丁質(zhì)酶可催化幾丁質(zhì)水解。通過基因工程將幾丁質(zhì)酶基因轉(zhuǎn)入植物體內(nèi)，可增強其抗真菌病的能力。回答下列問題：
（1）基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以從基因文庫中獲得。基因文庫包括和。
（2）生物體細胞內(nèi)的DNA復制開始時，解開DNA雙鏈的酶是。在體外利用PCR技術擴增目的基因時，使反應體系中的模板DNA解鏈為單鏈的條件是。上述兩個解鏈過程的共同點是破壞了DNA雙鏈分子中的。
（3）DNA連接酶是將兩個DNA片段連接起來的酶，常見的有和，其中既能連接黏性末端又能連接平末端的是。當幾丁質(zhì)酶基因和質(zhì)粒載體連接時，DNA連接酶催化形成的化學鍵是。
（4）提取RNA時，提取液中需添加RNA酶抑制劑，其目的是。
（5）若獲得的轉(zhuǎn)基因植株（幾丁質(zhì)酶基因已經(jīng)整合到植物的基因組中）抗真菌病的能力沒有提高，根據(jù)中心法則分析，其可能的原因是。發(fā)布：2025/1/5 8:0:1組卷：2引用：2難度：0.6