基因工程重組亞單位疫苗是預防新冠病毒感染和傳播的一種有效方案，其原理是把新冠病毒上負責“生產”S蛋白的那部分基因找到，構建體外重組表達載體，導入到微生物體內，“生產”出需要的S蛋白制成疫苗。下圖是在體外構建病毒S蛋白重組表達載體的實驗流程及相關限制酶的酶切位點。回答下列問題：
| 限制酶 | BamHI | BclI | Sau3AI | HindIII |
| 識別序列及切割位點 |
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（1）從患者肺部組織中分離并提取得到病毒RNA，通過
逆轉錄
逆轉錄
獲得S蛋白的cDNA，再通過 PCR
PCR
法對S蛋白的基因進行擴增，擴增的一般步驟是 變性→復性→延伸
變性→復性→延伸
。（2）用圖1中的質粒X和圖2中的S蛋白基因構建重組質粒，應選用
BclⅠ和HindⅢ
BclⅠ和HindⅢ
兩種限制酶切割，切割后通過 DNA連接
DNA連接
酶作用獲得重組質粒。（3）轉化前，用含
Ca2+（CaCl2）
Ca2+（CaCl2）
的溶液處理大腸桿菌，使其成為感受態(tài)細胞。轉化后，將大腸桿菌置于含 四環(huán)素
四環(huán)素
的培養(yǎng)基中培養(yǎng)，方便篩選出含重組質粒的大腸桿菌。為進一步鑒定篩選出的大腸桿菌是否導入S蛋白基因，可用引物 甲、丙
甲、丙
進行擴增驗證。【考點】基因工程的操作過程綜合．
【答案】逆轉錄；PCR；變性→復性→延伸；BclⅠ和HindⅢ；DNA連接；Ca2+（CaCl2）；四環(huán)素；甲、丙
【解答】
【點評】
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發(fā)布：2024/6/27 10:35:59組卷：1引用：2難度：0.7
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（2）生物體細胞內的DNA復制開始時，解開DNA雙鏈的酶是。在體外利用PCR技術擴增目的基因時，使反應體系中的模板DNA解鏈為單鏈的條件是。上述兩個解鏈過程的共同點是破壞了DNA雙鏈分子中的。
（3）DNA連接酶是將兩個DNA片段連接起來的酶，常見的有和，其中既能連接黏性末端又能連接平末端的是。當幾丁質酶基因和質粒載體連接時，DNA連接酶催化形成的化學鍵是。
（4）提取RNA時，提取液中需添加RNA酶抑制劑，其目的是。
（5）若獲得的轉基因植株（幾丁質酶基因已經整合到植物的基因組中）抗真菌病的能力沒有提高，根據中心法則分析，其可能的原因是。發(fā)布：2025/1/5 8:0:1組卷：2引用：2難度：0.6
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