氫能是潛力巨大的可再生清潔能源。利用產(chǎn)氣腸桿菌制氫具有條件溫和、環(huán)保等優(yōu)點。E.as菌是產(chǎn)氫率較高的菌種，為進一步提高其產(chǎn)氫率，科研人員開展了相關(guān)研究。
回答下列問題：
（1）為獲得E.as菌純系，可采用

平板劃線（或稀釋涂布平板）

平板劃線（或稀釋涂布平板）

法進行純培養(yǎng)。在培養(yǎng)過程中，設(shè)置未接種的平板作為對照。這樣做的目的是

檢測培養(yǎng)過程中是否被雜菌污染

檢測培養(yǎng)過程中是否被雜菌污染

。
（2）E.as菌是兼性厭氧菌，為研究呼吸方式是否會對其產(chǎn)氫率造成影響，請設(shè)計相關(guān)實驗進行探究（ 寫出實驗思路） 

取甲、乙兩組等量的葡萄糖培養(yǎng)液，接種等量的E.as菌；甲組控制為無氧、乙組通入氧氣；分別在適宜且相同條件下培養(yǎng)一段時間，測定產(chǎn)氫率。

取甲、乙兩組等量的葡萄糖培養(yǎng)液，接種等量的E.as菌；甲組控制為無氧、乙組通入氧氣；分別在適宜且相同條件下培養(yǎng)一段時間，測定產(chǎn)氫率。

。
（3）E.as菌細(xì)胞中hycA基因表達會抑制產(chǎn)氫代謝，科研人員通過同源重組方式滅活hycA蛋白，獲得了產(chǎn)氫率更高的工程菌E.as?A，其技術(shù)流程如圖所示。

在過程Ⅰ中可采用

Ca²⁺轉(zhuǎn)化

Ca²⁺轉(zhuǎn)化

法處理E.as菌，以促進DNA片段P的導(dǎo)入。在過程Ⅱ中，同源重組導(dǎo)致hycA蛋白滅活，其原因是

DNA片段P插入hycA基因，使之發(fā)生基因突變而不能表達

DNA片段P插入hycA基因，使之發(fā)生基因突變而不能表達

。依據(jù)基因工程的原理，采取其他手段也可達到同樣的滅活效果，可采用的其他手段有

基因敲除

基因敲除

（ 寫出1項即可）。過程Ⅲ應(yīng)將菌種接種含有

卡那霉素（和氯霉素）

卡那霉素（和氯霉素）

的培養(yǎng)基上進行篩選，最終獲得E.as?A工程菌。